Anticorpo Policlonale di Coniglio Anti-Acetil-DNMT1 (K1127/K1129/K1131/K1133) (P26358) per IHC-P, IF/ICC, ELISA

Specifiche e Parametri Principali del Prodotto

Contesto Biologico: Funzione e Localizzazione della DNA (citosina-5)-metiltransferasi 1

DNMT1 è una metiltransferasi del DNA critica, responsabile del mantenimento dei pattern di metilazione CpG durante la replicazione del DNA, garantendo l'eredità epigenetica. Metila preferenzialmente DNA emimetilato e si associa ai foci di replicazione nella fase S, ma agisce anche indipendentemente dalla replicazione durante le fasi G2 e M per preservare i paesaggi di metilazione globale. Il silenziamento mediato da DNMT1 coinvolge l'interazione diretta con HDAC2 e la formazione di complessi corepressori che modulano le modificazioni istoniche e l'espressione genica. Riferimenti correlati: PMID:17200670, PMID:18754681, PMID:21745816, PMID:26070743, PMID:10888872, PMID:24623306

L'enzima si localizza prevalentemente nel nucleo ed è reclutato sulla cromatina ai foci di replicazione tramite il suo dominio RFTS, che riconosce l'istone H3 ubiquitinato. Si localizza anche nelle regioni perinucleolari, riflettendo funzioni specializzate nel mantenimento dell'eterocromatina. Riferimenti correlati: PMID:12145218, PMID:24492612, PMID:29053958

DNMT1 è espressa in modo ubiquitario, con livelli particolarmente elevati nei tessuti fetali, cuore, rene, placenta e cellule mononucleate del sangue periferico, e minore espressione in milza, polmone, cervello, intestino tenue, colon, fegato e muscolo scheletrico. Riferimenti correlati: PMID:10325416

Le modificazioni post-traduzionali di DNMT1, in particolare l'acetilazione, svolgono ruoli regolatori chiave. Il cluster di lisine bersaglio di questo anticorpo (K1127/K1129/K1131/K1133 nell'isoforma 1) corrisponde a siti di acetilazione noti (K1111/K1113/K1115/K1117/K1119/K1121 nella sequenza canonica) che sono modificati da istone acetiltransferasi e possono influenzare la stabilità proteica, la localizzazione e l'interazione con altri fattori epigenetici. Riferimenti correlati: PMID:21947282, PMID:19608861

Guida Sperimentale e Consigli Tecnici

• Questo anticorpo policlonale di coniglio è stato generato contro un peptide sintetico acetilato che comprende K1127, K1129, K1131 e K1133 di DNMT1 umano. Si prevede che riconosca specificamente la forma acetilata della proteina.
• Per IHC-P, potrebbero essere necessari metodi standard di recupero dell'antigene (es. recupero dell'epitopo indotto dal calore in tampone citrato, pH 6.0) per esporre l'epitopo. La diluizione ottimale dell'anticorpo e le condizioni di incubazione dovrebbero essere determinate empiricamente.
• Quando si esegue IF/ICC, la fissazione con paraformaldeide al 4% seguita da permeabilizzazione con Triton X-100 allo 0,1% è comunemente utilizzata; tuttavia, questi passaggi devono essere validati nel sistema cellulare o tissutale specifico.
• ELISA può essere utilizzato per rilevare e quantificare i livelli di DNMT1 acetilato in lisati cellulari o estratti tissutali. Considerare l'impiego di un saggio di competizione con peptide per confermare la specificità di legame.
• Poiché DNMT1 è ampiamente espressa, includere controlli positivi e negativi appropriati (es. tessuti o linee cellulari con stato di acetilazione noto) per verificare i pattern di colorazione.
• Il peso molecolare previsto è di 183 kDa; se si riutilizza l'anticorpo per applicazioni non validate (es. Western blot), validare di conseguenza la dimensione della banda e la specificità.

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