Anticorpo monoclonale coniglio Acetil-Histone H3-K14 (Q16695/P68431) per WB, ChIP, ELISA

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione dell'istone H3

• L'istone H3 è un componente centrale del nucleosoma, l'unità fondamentale della cromatina, che impacchetta il DNA e regola l'accesso per la trascrizione, la replicazione, la riparazione e la stabilità cromosomica. I nucleosomi sono costituiti da circa 146 paia di basi di DNA avvolto attorno a un ottamero di istoni (due copie ciascuno di H2A, H2B, H3 e H4).
• L'acetilazione alla lisina 14 dell'istone H3 (H3K14ac) è un marcatore epigenetico ben caratterizzato associato a geni attivamente trascritti e regioni di cromatina aperta. È catalizzata principalmente da istone acetiltransferasi come GCN5/PCAF e viene riconosciuta dalle proteine contenenti domini bromo. Riferimenti correlati: PMID:16457588, PMID:16185088, PMID:16267050, PMID:17194708
• L'istone H3.1 canonico (codificato da più geni tra cui HIST1H3A, ecc., SWISS P68431) è espresso in modo dipendente dalla replicazione durante la fase S e depositato in tutto il genoma. Al contrario, l'istone H3.1t (SWISS Q16695, gene H3-4/HIST3H3) è una variante specifica del testicolo che sostituisce l'H3 canonico durante la spermatogenesi.
• Sia H3.1 che H3.1t condividono un elevato grado di identità di sequenza, inclusa la regione N-terminale contenente K14. L'immunogeno dell'anticorpo, un peptide sintetico acetilato a K14, garantisce il riconoscimento specifico di questa modifica in entrambe le varianti.
• La localizzazione subcellulare dell'istone H3 è nucleare, dove è prevalentemente associato ai cromosomi. La specificità tissutale per H3.1t è limitata alle cellule testicolari, mentre H3.1 è ubiquitaria.

Indicazioni sperimentali e consigli tecnici

• Progettazione dell'immunogeno: L'anticorpo è stato prodotto contro un peptide sintetico acetilato intorno alla K14 dell'H3 umano, garantendo un'elevata specificità per la forma acetilata. È possibile utilizzare saggi competitivi con peptide non acetilato per confermare il legame specifico per la modifica.
• Western Blotting (WB): L'istone H3 migra a circa 15 kDa in condizioni standard di SDS-PAGE. Per una rilevazione ottimale, si consiglia di utilizzare estratti nucleari e un'estrazione acida delicata per arricchire le proteine istoniche. Includere sempre controlli positivi e negativi appropriati (ad esempio, cellule trattate con inibitori delle istone deacetilasi rispetto a non trattate).
• Immunoprecipitazione della cromatina (ChIP): Questo anticorpo è indicato per applicazioni ChIP; tuttavia, può essere necessaria l'ottimizzazione della reticolazione, della frammentazione della cromatina e della concentrazione dell'anticorpo a seconda delle regioni genomiche target e del tipo cellulare.
• Immunofluorescenza/Immunistochimica (IF/IHC): È prevista una colorazione nucleare. Per sezioni incastonate in paraffina (IHC-P), può essere necessario il recupero dell'antigene. Convalidare la specificità dell'anticorpo con peptidi di blocco o tramite confronto con controlli di isotipo.
• Reattività per specie: L'anticorpo reagisce in modo incrociato con uomo, topo e ratto grazie all'elevata conservazione della sequenza intorno a K14. Per altre specie, verificare l'allineamento della sequenza prima dell'uso.
• Generali: Essendo un anticorpo monoclonale di coniglio, offre alta affinità, coerenza tra lotti e basso fondo. Conservare a -20°C ed evitare ripetuti cicli di congelamento-scongelamento.

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