Anticorpo monoclonale di coniglio contro Acetil-Istona H3-K18 (Q16695/P68431) | Convalidato per WB, IHC, ChIP, ELISA

Specifiche e parametri principali del prodotto

Background biologico: Funzione e localizzazione dell'Istona H3

• L'Istona H3 è una proteina nucleosomica centrale che avvolge e compatta il DNA nella cromatina, limitando l'accessibilità ai macchinari dipendenti dal DNA e svolgendo un ruolo centrale nella regolazione della trascrizione, nella riparazione del DNA, nella replicazione del DNA e nella stabilità cromosomica. Riferimenti correlati: UniProtKB Q16695, UniProtKB P68431

• Si localizza nel nucleo e si associa ai cromosomi. Riferimenti correlati: UniProtKB Q16695, UniProtKB P68431

• Riferimenti correlati: UniProtKB Q16695

• L'Istona H3 subisce estese modifiche post-traduzionali che costituiscono il "codice istonico". L'acetilazione della K18 (posizione 19 nella sequenza H3 canonica) è un marcatore chiave collegato all'attivazione trascrizionale e alla riparazione del DNA. Questa modificazione è regolata dinamicamente dalle HAT e dalle HDAC. L'acetilazione in questo sito è stata documentata in numerosi studi. Riferimenti correlati: PMID:19608861, PMID:16267050, PMID:16627869, PMID:17194708, PMID:35939806

Guida sperimentale e consigli tecnici

• L'immunogeno è un peptide acetilato sintetico intorno alla K18 dell'Istona H3 umana. Si prevede che l'anticorpo monoclonale di coniglio ottenuto riconosca specificamente la H3K18 acetilata, senza reazione crociata con la K18 non modificata o altri siti di acetilazione. Convalidare la specificità utilizzando saggi di competizione con peptidi sia acetilati che non acetilati oppure trattando le cellule con inibitori delle HDAC.
• Per il Western blotting (WB) è attesa una singola banda a ~16 kDa. Utilizzare controlli di caricamento appropriati (es. anticorpi totali contro Istona H3 o contro il C-terminale di H3) per normalizzare i livelli di acetilazione. I segnali di acetilazione possono essere aumentati trattando le cellule con inibitori delle deacetilasi come la trichostatina A (TSA) o il butirrato di sodio.
• Per l'immunistochimica (IHC-P) e l'immunofluorescenza (IF/ICC), ottimizzare le condizioni di recupero dell'antigene e permeabilizzazione. Per IHC-P è raccomandata la quenchaggio della perossidasi endogena. Convalidare la colorazione confrontandola con controlli isotipici.
• Per l'immunoprecipitazione della cromatina (ChIP), assicurarsi che le condizioni di cross-linking siano ottimizzate per le modifiche istoniche. Utilizzare loci di controllo positivi e negativi appropriati (es. geni attivamente trascritti vs loci silenziati). L'efficienza di arricchimento può essere verificata tramite qPCR.
• A causa dell'ampia reattività crociata prevista (uomo, topo, ratto e altre specie), confermare la reattività nella specie di interesse prima di procedere con esperimenti su larga scala. L'allineamento di sequenza mostra un'elevata conservazione della regione che circonda la K18 nei vertebrati.
• Per applicazioni ELISA e dot blot (DB), l'anticorpo può essere utilizzato per rilevare peptidi di H3K18 acetilata o istoni ricombinanti. Considerare l'uso di un anticorpo secondario biotinilato e streptavidina-HRP per l'amplificazione del segnale.

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