Anticorpo Policlonale di Coniglio Anti-Acetil-Istone H3-K23 (Q16695/P68431) per WB, ChIP, IHC-P, IF/ICC, ELISA

Specifiche e Parametri Principali del Prodotto

Contesto Biologico: Funzione e Localizzazione dell'Istone H3

L'Istone H3 è un componente centrale dei nucleosomi, le unità ripetitive fondamentali della cromatina. I nucleosomi avvolgono e compattano il DNA, limitando l'accesso ai macchinari cellulari che richiedono il DNA come modello. Attraverso questo ruolo strutturale, gli istoni sono centrali nella regolazione della trascrizione, nella riparazione del DNA, nella replicazione del DNA e nella stabilità cromosomica. L'accessibilità è modulata dinamicamente da un complesso insieme di modificazioni post-traduzionali (PTM) note collettivamente come codice istonico, insieme al rimodellamento del nucleosoma.

L'acetilazione alla lisina 23 (K23) della coda N-terminale dell'istone H3 è una PTM significativa che contribuisce alla decondensazione della cromatina e all'attivazione genica. Questo sito corrisponde a K24 in alcune numerazioni di sequenza a causa del clivaggio della metionina iniziatrice. Numerosi studi hanno identificato l'acetilazione di K23 in vari contesti cellulari, collegandola a stati di cromatina aperta e alla regolazione trascrizionale.

Riferimenti correlati: PMID:19608861, PMID:16267050, PMID:16457588

La proteina Istone H3.1 (codificata da geni come H3C1, H3C2, H3C3, H3C4, H3C6, H3C7, H3C8, H3C10, H3C11, H3C12 e HIST1H3A) è tipicamente localizzata nel nucleo e nel cromosoma. L'isoforma specifica del testicolo H3.1t (Q16695) è espressa nelle cellule testicolari, mentre la H3.1 canonica (P68431) è ubiquitaria. Entrambe le varianti condividono il sito di acetilazione K23 conservato.

L'Istone H3 è soggetta a numerose altre PTM, tra cui metilazione, fosforilazione, citrullinazione e altre acilazioni, che regolano in modo intricato la funzione della cromatina. La specificità dell'anticorpo per la forma acetilata di K23 consente una precisa dissezione di questi meccanismi regolatori.

Guida Sperimentale e Consigli Tecnici

• Questo anticorpo è generato contro un peptide acetilato sintetico corrispondente ai residui circostanti K23 dell'Istone H3 umano. Si prevede una reattività incrociata in un'ampia gamma di specie a causa della conservazione della sequenza di questa regione; confermare sempre con i propri campioni.
• Per il Western blot (WB), ci si aspetta una banda intorno a 15 kDa. Considerare di caricare controlli positivi e negativi appropriati (ad es., cellule trattate con inibitori delle istone deacetilasi vs. non trattate) per verificare il segnale dipendente dall'acetilazione.
• Nell'immunoistochimica (IHC-P) e nell'immunofluorescenza (IF/ICC), potrebbe essere necessaria l'ottimizzazione del recupero dell'antigene e del blocco; convalidare la specificità utilizzando la competizione con peptide o linee cellulari knockout se disponibili.
• Per l'immunoprecipitazione della cromatina (ChIP), assicurarsi una corretta reticolazione e frammentazione. Includere un controllo IgG aspecifico e testare diverse concentrazioni di anticorpo. Questo anticorpo è adatto per il ChIP come indicato dal fornitore.
• ELISA e altre applicazioni dovrebbero essere convalidate nel sistema di campioni rilevante. Sensibilità e specificità possono variare tra i saggi.
• Come per qualsiasi anticorpo specifico per una modifica in un sito, la consistenza da lotto a lotto può influenzare i risultati; titolare sempre e confermare la diluizione di lavoro ottimale.

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