Anticorpo monoclonale di coniglio Acetil-Istone H3-K27 per ChIP, WB e IHC (SWISS: Q16695 / P68431)

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione dell'istone H3 (acetilazione K27)

• L'istone H3 è un componente fondamentale del nucleosoma, che avvolge e compatta il DNA nella cromatina, limitando quindi l'accessibilità del DNA ai macchinari cellulari che lo utilizzano come stampo. Gli istoni svolgono un ruolo centrale nella regolazione della trascrizione, nella riparazione del DNA, nella replicazione del DNA e nella stabilità cromosomica. L'accessibilità del DNA è regolata dinamicamente da un complesso insieme di modifiche post-traduzionali (PTM), note collettivamente come codice istonico, e dal rimodellamento dei nucleosomi. Riferimenti: UniProt Q16695, UniProt P68431
• L'istone H3 è localizzato principalmente nel nucleo ed è un componente strutturale chiave dei cromosomi. Si trova sia nell'eucromatina che nell'eterocromatina, dove i pattern delle PTM distinguono questi due stati. Riferimenti: UniProt Q16695, UniProt P68431
• Due isoforme principali sono rappresentate dalle accessioni SWISS Q16695 (istone H3.1t specifico del testicolo) e P68431 (istone H3.1 dipendente dalla replicazione), che è ampiamente espresso. La variante specifica del testicolo è espressa esclusivamente nelle cellule testicolari. Riferimenti: UniProt Q16695
• L'istone H3 subisce un ampio spettro di modifiche post-traduzionali, tra cui acetilazione, metilazione, fosforilazione, ubiquitinazione e ADP-ribosilazione. L'acetilazione di specifici residui di lisina è un marcatore epigenetico critico associato all'attivazione trascrizionale. Ad esempio, l'acetilazione alla lisina 19 (K19ac) è stata identificata da numerosi studi (PMID:19608861). Sebbene la knowledgebase di UniProt non annoti attualmente l'acetilazione a K27, questa modificazione è un marcatore ben caratterizzato nella letteratura scientifica. Il marcatore acetil-lisina è regolato dinamicamente da istone acetiltransferasi (HAT) e deacetilasi (HDAC), influenzando la struttura della cromatina e l'espressione genica. Riferimenti: PMID:19608861, UniProt Q16695

Indicazioni sperimentali e consigli tecnici

• L'immunogeno è un peptide acetilato sintetico corrispondente alla regione K27, il che indica la specificità dell'anticorpo per lo stato acetilato. Verificare la specificità utilizzando controlli di competizione con peptide non acetilato o deacetilazione enzimatica.
• Questo anticorpo è stato validato per un ampio ventaglio di applicazioni: Western Blot (WB), Dot Blot (DB), Immunohistochimica su paraffina (IHC-P), Immunofluorescenza/Immunocitochimica (IF/ICC), ELISA, Immunoprecipitazione della cromatina (ChIP) e ChIP-seq. Per le applicazioni di ChIP, si consiglia di ottimizzare la reticolazione e la concentrazione dell'anticorpo in base al proprio contesto specifico di cromatina.
• Il peso molecolare previsto è di 15 kDa. Utilizzare gel di SDS-PAGE ad alta percentuale (es. 15%) o gel a gradiente per una risoluzione ottimale delle proteine a basso peso molecolare.
• La cross-reattività è prevista per Uomo, Topo, Ratto e altre specie (previsione di ampio spettro) basata sulla conservazione della sequenza dell'istone H3. Convalidare la reattività nella specie di interesse se non espressamente indicata.
• I protocolli di estrazione degli istoni (estrazione acida o ad alta salinità) possono migliorare il segnale in WB arricchendo le proteine nucleari.
• Per applicazioni quantitative, si consiglia di utilizzare l'istone H3 ricombinante con e senza acetilazione K27 come standard.

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