Acetil-Istone H3-K27 Anticorpo Monoclonale Coniglio (Q16695/P68431) per WB, ChIP, IF, IHC

Specifiche e Parametri Principali del Prodotto

Contesto Biologico: Funzione e Localizzazione dell'Istone H3 (H3.1/H3.1t)

• L'istone H3 è un componente centrale del nucleosoma, l'unità ripetitiva fondamentale della cromatina. I nucleosomi avvolgono e compattano il DNA, regolando così l'accesso al materiale genetico per la trascrizione, la replicazione del DNA, la riparazione e la ricombinazione. Questa architettura è essenziale per la stabilità cromosomica e la corretta funzione cellulare. Riferimenti correlati: UniProt Q16695, UniProt P68431.

• Negli esseri umani, esistono molteplici varianti non alleliche dell'istone H3, tra cui le proteine canoniche H3.1 dipendenti dalla replicazione (codificate da geni come H3C1, H3C2, ecc., GeneID: 8350, 8290) e la variante testicolo-specifica H3.1t (codificata da H3-4, nota anche come H3FT, HIST3H3). L'H3.1 canonica è espressa in modo ubiquitario, mentre l'espressione di H3.1t è limitata alle cellule testicolari. Riferimenti correlati: UniProt Q16695 (specificità tissutale).

• Sia H3.1 che H3.1t si localizzano nel nucleo e si associano ai cromosomi. Contengono un dominio "histone fold" che media il loro incorporamento nei nucleosomi e una coda N-terminale che sporge dal nucleosoma, fungendo da piattaforma per una miriade di modificazioni post-traduzionali (PTM). Riferimenti correlati: UniProt P68431.

• La coda N-terminale dell'istone H3 è soggetta a estese PTM tra cui acetilazione, metilazione, fosforilazione, citrullinazione e altre, collettivamente note come "codice istonico". Queste modificazioni orchestrare la dinamica della cromatina e i pattern di espressione genica. L'acetilazione dei residui di lisina, come in posizione 27 (K27), è un segno distintivo delle regioni di cromatina attiva, inclusi enhancer e promotori, facilitando una configurazione di cromatina aperta che promuove l'attivazione genica. Riferimenti correlati: UniProt P68431 (panoramica PTM).

• L'anticorpo qui descritto è stato generato contro un peptide sintetico corrispondente alla lisina 27 acetilata dell'istone H3 umana (isoforma H3.1, NP_003520.1). Riconosce specificamente la forma acetilata ed è adatto per rilevare questa modificazione in una varietà di applicazioni.

Guida Sperimentale e Consigli Tecnici

• Questo anticorpo è stato generato utilizzando un immunogeno peptidico sintetico acetilato; considerare che può riconoscere l'epitopo sia in conformazioni lineari (denaturate) che native, rendendolo adatto per applicazioni come Western blot (WB), immunoprecipitazione e saggi basati sulla cromatina.
• Per il WB, il peso molecolare previsto dell'istone H3 è di ~15 kDa. Tuttavia, gli istoni possono migrare in modo anomalo a seconda delle condizioni del gel; includere controlli positivi appropriati (ad es., lisato cellulare totale HeLa) e marcatori di peso molecolare.
• Nelle applicazioni di immunoprecipitazione della cromatina (ChIP) e CUT&Tag, confermare la specificità e l'efficienza dell'anticorpo eseguendo saggi di competizione con peptide e includendo loci target noti (ad es., enhancer attivi marcati da H3K27ac) come controlli positivi.
• A causa della prevista ampia reattività crociata (Umano, Topo, Ratto e altri), questo anticorpo può essere adatto per varie specie, ma si raccomanda la validazione nel sistema campione specifico.
• Per l'immunofluorescenza (IF/ICC) e l'immunoistochimica (IHC-P), l'accessibilità dell'epitopo può essere influenzata dai protocolli di fissazione e permeabilizzazione; si consiglia l'ottimizzazione di questi passaggi.
• Le prestazioni dell'anticorpo in ELISA e dot blot (DB) possono essere valutate utilizzando peptidi acetilati versus non acetilati per valutarne la specificità.

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