Anticorpo policlonale coniglio Acetil-Istona H3-K27 (Q16695/P68431) per WB, DB, ELISA, ChIP – CamelBio

Specifiche principali del prodotto e parametri

Contesto biologico: Funzione e localizzazione dell'istona H3

L'istona H3 è un componente principale del nucleosoma, l'unità fondamentale ripetuta della cromatina. I nucleosomi avvolgono e compattano il DNA, controllando così l'accessibilità del DNA per la trascrizione, la replicazione e la riparazione. Le istone giocano un ruolo centrale nel mantenimento della stabilità cromosomica e nella regolazione dell'espressione genica attraverso una gamma dinamica di modificazioni post-traduzionali (PTM) note come "codice delle istone". Queste modificazioni, tra cui acetilazione, metilazione, fosforilazione e ubiquitinazione, orchestrano la struttura della cromatina e reclutano proteine effetrici.

Le varianti H3, come l'H3.1 canonico (codificato da più geni inclusi H3C1–H3C12) e l'H3.1t specifico del testicolo (H3-4), condividono sequenze altamente conservate. L'acetilazione alla lisina 27 (H3K27ac) è un marchio epigenetico chiave associato principalmente a enhancer e promotori attivi, facilitando una conformazione della cromatina aperta permissiva alla trascrizione.

L'istona H3 si localizza prevalentemente nel nucleo e si trova lungo i cromosomi. Mentre H3.1 è espresso nella maggior parte delle cellule in divisione, H3.1t è arricchito nelle cellule testicolari, riflettendo il suo ruolo nel rimodellamento della cromatina durante la spermatogenesi.

Riferimenti correlati: PMID:17194708

Guida sperimentale e suggerimenti tecnici

• Per il Western blotting (WB), considerare l'uso di lisati cellulari totali o estratti arricchiti di istone. Confermare la specificità pre-incubando l'anticorpo con peptidi di blocco acetilati rispetto a quelli non acetilati.
• Nelle applicazioni dot blot (DB) ed ELISA, titolare l'anticorpo e includere controlli peptidici sia acetilati che non acetilati per valutare la specificità di legame.
• Per la ChIP, ottimizzare le condizioni di cross-linking e sonicazione per il tipo di cellule. Validare l'arricchimento tramite qPCR a loci noti positivi per H3K27ac (es. promotori di geni attivi) e regioni di controllo negative. Includere sempre un controllo finto IgG.
• Suggerimento generale: poiché le modificazioni delle istone sono dinamiche e possono cambiare durante il ciclo cellulare o in risposta agli stimoli, gestire e processare sempre i campioni in modo coerente per preservare le PTM ed evitare artefatti.

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