Anticorpo policlonale di coniglio Acetil-Istona H3-K9/K14/K18/K23/K27 (Q16695/P68431) per WB, IF/ICC, ELISA

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione dell'istone H3

L'istone H3 è un componente centrale del nucleosoma, l'unità ripetitiva fondamentale della cromatina. Come parte dell'ottamero di istoni, svolge un ruolo essenziale nell'avvolgimento e nella compattazione del DNA, limitando di conseguenza l'accessibilità del DNA per i macchinari cellulari che lo utilizzano come stampo. Questa base strutturale permette agli istoni di regolare in modo centrale la trascrizione, la riparazione del DNA, la replicazione del DNA e la stabilità cromosomica.

La coda N-terminale dell'istone H3 è soggetta a estese modifiche post-traduzionali (PTM), tra cui acetilazione, metilazione, fosforilazione e altre, che costituiscono un complesso "codice istonico". Queste modifiche controllano dinamicamente l'architettura della cromatina e l'espressione genica. In particolare, è noto che l'acetilazione dei residui di lisina 9, 14, 18, 23 e 27 neutralizza la carica positiva delle lisine, indebolendo l'interazione tra istoni e DNA. Questo porta a una conformazione della cromatina più aperta (eucromatina) ed è fortemente associata all'attivazione trascrizionale. I marchi di acetilazione in questi siti sono riconosciuti dalle proteine contenenti bromodominio e dai remodeling della cromatina, facilitando il reclutamento del macchinario trascrizionale. Riferimenti correlati:

• PMID:16627869
• PMID:19608861

L'istone H3 è localizzato principalmente nel nucleo e sui cromosomi, dove viene incorporato nella cromatina durante la replicazione del DNA (per varianti dipendenti dalla replicazione come H3.1) o in modo indipendente dalla replicazione (per varianti di sostituzione). La proteina canonica H3.1 (codificata da più geni, tra cui HIST1H3A–J) è espressa in molti tessuti, mentre la variante H3.1t specifica del testicolo (H3-4, codificata da HIST3H3) si trova nelle cellule testicolari. Entrambe le varianti condividono la sequenza conservata della coda N-terminale contenente le lisine acetilate bersagliate da questo anticorpo.

Guida sperimentale e consigli tecnici

• L'immunogeno è un peptide acetilato sintetico che comprende K9, K14, K18, K23 e K27 dell'istone H3 umano. Questo progetto multisito può permettere una rilevazione ampia di H3 iperacetilato; si consiglia di verificare la specificità utilizzando controlli di peptide non acetilati nei saggi competitivi.
• Per il Western blotting, l'estrazione acida degli istoni o il frazionamento arricchito in cromatina può migliorare il rapporto segnale/rumore; si consiglia la normalizzazione del caricamento con un anticorpo anti-istone H3 totale per tenere conto del possibile mascheramento dell'epitopo da parte di altre PTM.
• Nell'immunofluorescenza/ICC, la permeabilizzazione con Triton X-100 o digitonina può migliorare la penetrazione dell'anticorpo nel nucleo; le condizioni di fissazione devono essere ottimizzate per bilanciare accessibilità dell'epitopo e morfologia.
• Le applicazioni ELISA possono trarre vantaggio dall'inclusione di rivestimenti con peptide sia acetilato che non acetilato per confermare il legame selettivo.
• La reattività crociata prevista con uomo, topo, ratto e altre specie suggerisce l'utilizzabilità in più sistemi modello; tuttavia, la convalida nel sistema di campioni specifico e nel contesto sperimentale è essenziale.

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