Anticorpo monoclonale di coniglio contro Acetil-Istone H3 (Lys4) per WB, ChIP, IF | Q16695/P68431

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione dell'istone H3

• L'istone H3 è una componente fondamentale del nucleosoma, che avvolge e compatta il DNA nella cromatina. Questo processo limita l'accessibilità del DNA ai macchinari cellulari che richiedono il DNA come stampo, svolgendo quindi un ruolo centrale nella regolazione della trascrizione, nella riparazione del DNA, nella replicazione del DNA e nella stabilità cromosomica. Riferimenti correlati: UniProtKB Q16695, UniProtKB P68431

• L'accessibilità del DNA è regolata da una complessa serie di modifiche post-traduzionali (PTM) sugli istoni, chiamate collettivamente "codice istonico", e dal rimodellamento dei nucleosomi. Queste PTM includono acetilazione, metilazione, fosforilazione, citrullinazione, ADP-ribosilazione e diverse acilazioni. Riferimenti correlati: PMID:19608861, PMID:16267050, PMID:17194708

• L'istone H3 si localizza principalmente nel nucleo ed è associato ai cromosomi per tutto il ciclo cellulare. Riferimenti correlati: UniProtKB Q16695, UniProtKB P68431

• Mentre l'istone H3.1 canonico (codificato da più geni, ad esempio HIST1H3A) è espresso in modo ubiquario, la variante H3.1t (H3-4, HIST3H3) è espressa specificamente nelle cellule testicolari, suggerendo ruoli specializzati nell'organizzazione della cromatina durante la spermatogenesi. Riferimenti correlati: UniProtKB Q16695

• L'acetilazione della lisina 4 sull'istone H3 (H3K4ac) è una modificazione ben caratterizzata associata a promotori attivi e cromatina aperta. Spesso coesiste con altri marcatori attivatori e viene riconosciuta dalle proteine contenenti bromodominio per facilitare l'attivazione trascrizionale.

Indicazioni sperimentali e consigli tecnici

• L'immunogeno è un peptide sintetico acetilato corrispondente ai residui intorno alla posizione K4 dell'istone H3 umano. Grazie all'elevata conservazione della coda N-terminale tra le specie, è prevista reattività crociata con campioni di topo e ratto; si consiglia comunque di verificare le prestazioni nel modello sperimentale specifico.

• Per i saggi ChIP, si consiglia di convalidare la specificità dell'anticorpo con peptidi concorrenti acetilati e non acetilati per confermare l'arricchimento nei loci bersaglio.

• Nel Western blotting, l'istone H3 migra a circa 15 kDa. Ottimizzare la percentuale di gel e le condizioni di trasferimento per proteine a basso peso molecolare; si consigliano lisati proteici nucleari o estratti in acido per ottenere un segnale più arricchito.

• Per l'immunofluorescenza, testare diversi protocolli di fissazione (ad esempio PFA al 4% vs metanolo) e permeabilizzazione, poiché questi possono influenzare l'accessibilità dell'epitopo e il fondo.

• Data l'ampia gamma di modifiche presenti sulla porzione N-terminale di H3, assicurarsi che la rilevazione non sia influenzata dalle PTM vicine utilizzando controlli appropriati e, se possibile, istoni mutati o proteine ricombinanti.

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