Anticorpo Policlonale di Coniglio Anti-Acetil-Istone H4 (K12) per WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA - P62805

Specifiche e Parametri Principali del Prodotto

Contesto Biologico: Funzione e Localizzazione dell'Istone H4

L'Istone H4 è una delle quattro istoni core che formano il nucleosoma, l'unità ripetitiva fondamentale della cromatina. Come proteina strutturale altamente conservata, svolge un ruolo essenziale nel confezionamento e nell'organizzazione del DNA all'interno del nucleo, influenzando direttamente l'espressione genica, la replicazione, la riparazione del DNA e la stabilità cromosomica.

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La funzione dell'Istone H4 è regolata dinamicamente da una vasta gamma di modifiche post-traduzionali (PTM), collettivamente denominate 'codice istonico'. L'acetilazione in specifici residui di lisina, inclusa la lisina 12 (K12, corrispondente a K13 in UniProt P62805), è un marcatore epigenetico chiave che modula la struttura della cromatina e promuove la trascrizione attiva. L'acetilazione in questo residuo è stata documentata in numerosi studi.

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La localizzazione subcellulare dell'Istone H4 è prevalentemente nucleare, dove si associa al DNA cromosomico. Specifici pattern di acetilazione, come quello alla K12, possono influenzarne la dinamica di localizzazione durante processi come la spermatogenesi.

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Strutturalmente, la proteina Istone H4 ha un peso molecolare di circa 11,4 kDa ed è codificata da multiple copie geniche (es. H4C1, H4C2, ecc.) che producono una sequenza proteica identica. Questa molteplicità garantisce gli alti livelli di espressione richiesti per l'assemblaggio della cromatina. Data l'estrema conservazione evolutiva della sequenza dell'Istone H4 tra le specie, gli anticorpi diretti contro questa proteina spesso mostrano un'ampia reattività crociata.

Guida Sperimentale e Consigli Tecnici

• Progettazione dell'Immunogeno: Questo anticorpo è stato generato contro un peptide sintetico acetilato attorno alla K12. Per una rilevazione specifica, considerare che l'anticorpo potrebbe riconoscere preferenzialmente la forma acetilata; la validazione con campioni trattati con inibitori delle deacetilasi può migliorare il segnale.
• Western Blotting (WB): L'Istone H4 ha un basso peso molecolare (~11 kDa). Utilizzare gel SDS-PAGE al 15% o gradienti e assicurare un trasferimento efficiente (es. trasferimento umido notturno a bassa tensione) per prevenire la perdita di proteine piccole. Includere marcatori di peso molecolare appropriati e confermare la specificità utilizzando saggi di competizione con peptide non acetilato se necessario.
• Immunoistochimica (IHC-P) & Immunofluorescenza (IF/ICC): La recupero dell'antigene (es. con buffer citrato, pH 6.0) può migliorare l'accessibilità dell'epitopo. Utilizzare tessuti di controllo positivo con trascrizione attiva o proliferazione (es. testicolo, timo) e considerare il blocco della biotina o delle perossidasi endogene secondo i protocolli standard.
• ELISA: Per l'analisi quantitativa, rivestire le piastre con peptide H4 acetilato o estratti istonici e verificare la specificità del peptide utilizzando controlli non acetilati.
• Reattività Crociata: Si prevede che l'anticorpo reagisca in modo crociato con l'Istone H4 acetilato di umano, topo, ratto e molte altre specie. Validare nel proprio sistema sperimentale per escludere il legame con H4 non acetilato o altre proteine acetilate, in particolare data la natura policlonale dell'anticorpo.
• Approcci Alternativi: Se è richiesta un'alta specificità per il solo marcatore acetil-K12, considerare l'accoppiamento con un anticorpo monoclonale o l'utilizzo di saggi di competizione sito-specifici per confermare il riconoscimento dell'epitopo.

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