Acetyl-Histone H4-K16 (P62805) Anticorpo Policlonale Coniglio per WB e ELISA – Ricerca Epigenetica

Specifiche e Parametri Principali del Prodotto

Contesto Biologico: Funzione e Localizzazione dell'Istone H4

• Componente principale del nucleosoma: L'istone H4 è uno dei quattro istoni core che formano l'ottamero del nucleosoma, attorno al quale il DNA è avvolto per formare la cromatina. Questa struttura fondamentale limita l'accessibilità del DNA e quindi regola la trascrizione, la riparazione del DNA, la replicazione e la stabilità cromosomica. Riferimenti correlati: UniProt P62805
• Localizzazione subcellulare: In condizioni stazionarie, l'istone H4 si trova principalmente nel nucleo, strettamente associato ai cromosomi. L'acetilazione, come ad esempio a K16, influenza la sua localizzazione dinamica; ad esempio, si osserva che l'H4 acetilato si localizza nel nucleo negli spermatidi allo stadio 11. Riferimenti correlati: UniProt P62805
• Modificazioni post-traduzionali e il codice degli istoni: L'istone H4 è soggetto a una vasta gamma di modificazioni post-traduzionali (PTM) sulla sua coda N-terminale, tra cui acetilazione, metilazione, fosforilazione, ubiquitinazione e vari marchi di acilazione (es. crotonilazione, butirrilazione, succinilazione). Queste modifiche costituiscono un "codice degli istoni" che governa la struttura della cromatina e l'espressione genica. L'acetilazione a residui specifici di lisina, inclusa K16, è un tratto distintivo dell'eucromatina trascrizionalmente attiva. Riferimenti correlati: UniProt P62805
• Significato funzionale dell'acetilazione K16: L'acetilazione di H4 alla lisina 16 (H4K16ac) è particolarmente critica per la ripiegamento di ordine superiore della cromatina e la regolazione trascrizionale. Questa modificazione neutralizza la carica positiva della lisina, interrompendo le interazioni internucleosomiche e promuovendo una conformazione della cromatina aperta. È implicata nella compensazione della dose, nella riparazione dei danni al DNA e nell'invecchiamento cellulare. Riferimenti correlati: PMID:2474456, PMID:7664735, PMID:19608861 (acetilazione generale negli istoni)
• Conservazione evolutiva: La sequenza amminoacidica dell'istone H4 è notevolmente conservata negli eucarioti, dal lievito all'uomo, che sottolinea l'ampio intervallo di cross-reattività prevista di questo anticorpo. Riferimenti correlati: UniProt P62805

Guida Sperimentale e Consigli Tecnici

• Considerazioni sulla progettazione dell'immunogeno: L'anticorpo è stato sviluppato contro un peptide acetilato sintetico corrispondente ai residui circostanti la lisina 16 dell'istone H4 umano. Questa progettazione garantisce la specificità per lo stato acetilato di K16; tuttavia, la cross-reattività con H4 non modificato o altre lisine acetilate dovrebbe essere valutata nel proprio sistema sperimentale.
• Linee guida per Western blot (WB): Quando si esegue la WB, considerare l'utilizzo di estratti di istoni cellulari totali o istoni estratti con acido da cellule umane, di topo o ratto, poiché la cross-reattività prevista è ampia. A causa del basso peso molecolare (~11 kDa), utilizzare SDS-PAGE al 15% o gel a gradiente per una risoluzione ottimale. Validare la specificità confrontando i segnali con controlli non acetilati o utilizzando inibitori delle deacetilasi (es. TSA, butirrato di sodio) per confermare il legame al bersaglio.
• Applicazioni ELISA: Questo anticorpo potrebbe essere adatto per il rilevamento basato su ELISA di peptidi H4 acetilati o istoni purificati. Confermare le concentrazioni ottimali dell'antigene di rivestimento e considerare il blocco con tamponi di blocco non fosfo/non acetile per ridurre il rumore di fondo.
• Cross-reattività tra specie: È prevista un'ampia cross-reattività basata sull'alta conservazione evolutiva della sequenza dell'istone H4. Sebbene sia stato riportato che l'anticorpo reagisce con umano, topo e ratto, si raccomanda la verifica in altre specie a causa di potenziali differenze nelle PTM.
• Nota tecnica generale: Come per tutti gli anticorpi specifici per PTM, assicurarsi che la preparazione del campione minimizzi l'attività delle deacetilasi endogene (es. includere inibitori HDAC nel tampone di lisi) per preservare il segnale di acetilazione.

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