Anticorpo policlonale coniglio Acetil-Istone H4-K5 (P62805) – Validato per WB, IHC-P, ELISA, ChIP

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione dell'istone H4

• L'istone H4 è un componente fondamentale del nucleosoma, responsabile dell'avvolgimento e della compattazione del DNA nella cromatina. Questa compattazione limita l'accessibilità al DNA, svolgendo quindi un ruolo centrale nella regolazione della trascrizione, nella riparazione del DNA, nella replicazione del DNA e nella stabilità cromosomica. Riferimenti correlati: UniProt P62805

• La proteina si localizza principalmente nel nucleo e si associa ai cromosomi. È stata osservata la sua localizzazione nucleare quando è acetilato negli spermatidi allo stadio 11. Riferimenti correlati: UniProt P62805

• L'istone H4 subisce estese modifiche post-traduzionali (PTM) sulla sua coda N-terminale, che insieme costituiscono il "codice istonico". L'acetilazione alla lisina 5 (bersaglio di questo anticorpo) è una modificazione chiave associata a stati di cromatina attiva. Riferimenti correlati: PMID:2474456, PMID:7664735, PMID:19608861

• Altre modificazioni includono metilazione, fosforilazione e diverse acilazioni, che si coordinano per regolare l'espressione genica e altri processi dipendenti dal DNA come stampo. Riferimenti correlati: UniProt P62805

Guida sperimentale e suggerimenti tecnici

• Progettazione dell'immunogeno: L'anticorpo è stato prodotto contro un peptide sintetico che comprende gli amminoacidi 1-100 dell'istone H4 umano, che include la coda N-terminale e l'epitopo Lys5 acetilato. Si consiglia di utilizzare un peptide non acetilato o mutato (K5A) come controllo negativo per confermare la specificità.
• Western Blot (WB): L'istone H4 ha un peso molecolare previsto di ~11 kDa. Assicurare una separazione adeguata su gel di SDS-PAGE ad alta percentuale (es. 15-18%) e verificare l'intensità della banda normalizzata rispetto ai controlli di caricamento di istoni totali (es. Istone H3, H4 totale).
• Immunoistochimica su paraffina (IHC-P): Il recupero dell'antigene è consigliato a causa della natura compatta della cromatina; è possibile testare tampone citrato (pH 6,0) o Tris-EDTA (pH 9,0). I pattern di acetilazione possono variare in base al tessuto e alle condizioni di fissazione.
• ELISA: L'anticorpo può essere utilizzato per rilevare peptidi di istoni acetilati o istoni estratti con acido rivestiti direttamente sulle piastre. Ottimizzare la concentrazione di rivestimento e le fasi di bloccaggio per ridurre al minimo il fondo.
• Immunoprecipitazione della cromatina (ChIP): Adatto per la mappatura genome-wide dei loci H4K5ac. Tempi di reticolazione e condizioni di shearamento della cromatina devono essere determinati empiricamente per ogni tipo di campione. Si consiglia un Western blot post-ChIP per confermare l'arricchimento.
• Reattività incrociata: La sequenza dell'immunogeno è altamente conservata tra uomo, topo e ratto, e il produttore prevede un'ampia gamma di reattività. Validare la specie di interesse tramite allineamento di sequenza e test preliminari.

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