Anticorpo monoclonale di coniglio Acetil-p53 (K370) (P04637) per Western Blot e ELISA

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di p53 (TP53)

p53 (Antigene tumorale cellulare p53, TP53) è una proteina oncosoppressore ben caratterizzata che agisce come fattore di trascrizione multifunzionale. Induce l'arresto del ciclo cellulare, la riparazione del DNA o l'apoptosi dopo legame alle sequenze di DNA bersaglio, mantenendo così la stabilità genomica e prevenendo lo sviluppo del cancro (PubMed:11025664, 12524540, 12810724, 15340061, 17317671, 24051492).

Riferimenti correlati: PMID:11025664, PMID:12524540, PMID:12810724, PMID:15340061, PMID:17317671, PMID:24051492

Gli studi di localizzazione subcellulare mostrano che p53 si trova prevalentemente nel nucleo in condizioni normali, ma può traslocare nel citoplasma, nei mitocondri, nei corpi PML e nel reticolo endoplasmatico in risposta a diversi stress cellulari. Questa compartimentazione dinamica è fondamentale per le sue diverse funzioni, tra cui la regolazione della trascrizione e l'induzione dell'apoptosi (PubMed:15340061, 22726440, 11025664, 12810724, 17170702, 25168243, 27323408, 28842590).

Riferimenti correlati: PMID:15340061, PMID:22726440, PMID:11025664, PMID:12810724, PMID:17170702, PMID:25168243, PMID:27323408, PMID:28842590

p53 è espressa ubiquitariamente nella maggior parte dei tessuti, con più isoforme che presentano profili di espressione distinti. L'isoforma principale 1 è espressa ampiamente, mentre altre isoforme mostrano presenza o assenza tessuto-specifica, aggiungendo un livello di complessità regolatoria (PubMed:16131611).

Riferimenti correlati: PMID:16131611

L'attività di p53 è strettamente controllata da estese modifiche post-traduzionali (PTM), tra cui fosforilazione, acetilazione, metilazione e ubiquitinazione. La lisina 370 (K370) nel dominio regolatorio C-terminale è un punto caldo per queste modifiche: subisce metilazione e dimetilazione ad opera di enzimi come SMYD2 e altri, che modulano la stabilità e l'attività trascrizionale di p53. Questo anticorpo è stato generato utilizzando un peptide sintetico acetilato corrispondente alla regione K370 della p53 umana (P04637), e riconosce specificamente la forma acetilata in questo residuo. L'acetilazione in K370 è associata a un legame al DNA potenziato e all'attivazione dei geni bersaglio di p53, collegandola alla soppressione tumorale.

Riferimenti correlati: PMID:17108971, PMID:22864287 (Per metilazione/dimetilazione in K370)

Indicazioni sperimentali e consigli tecnici

• L'anticorpo è prodotto in coniglio ed è monoclonale, garantendo elevata specificità e coerenza tra lotti.
• Per il Western blotting, si consiglia di arricchire gli estratti di proteine nucleari, poiché p53 è prevalentemente nucleare; tuttavia, a seconda delle condizioni di stress cellulare, p53 può essere presente anche nelle frazioni citoplasmatiche o mitocondriali.
• Validare le prestazioni dell'anticorpo su campioni di controllo positivo noti per esprimere p53 acetilata, come cellule trattate con inibitori delle deacetilasi (es. trichostatina A o nicotinamide) o agenti danneggianti il DNA (es. etoposide, doxorubicina).
• Quando si utilizza l'ELISA, rivestire la piastra con il peptide immunogeno (acetilato) e un peptide controllo non acetilato per confermare la specificità.
• La reattività crociata è confermata per uomo e topo, ma si consiglia di valutare l'allineamento di sequenza se si testano altre specie.
• Ottimizzare empiricamente le diluizioni di lavoro; le diluizioni iniziali consigliate sono: 1:500‑1:2000 per WB, 1:1000‑1:5000 per ELISA (da titolare dall'utilizzatore finale).

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