Anticorpo policlonale coniglio Acetil-p53-K382 (P04637) per Dot Blot e ELISA

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione dell'antigene tumorale cellulare p53 (TP53)

L'antigene tumorale cellulare p53 (TP53) è un fattore di trascrizione multifunzionale che svolge un ruolo centrale nella soppressione tumorale, indurre l'arresto del ciclo cellulare, la riparazione del DNA o l'apoptosi in risposta a stress cellulari. Agisce come guardiano del genoma, regolando negativamente la divisione cellulare controllando l'espressione di geni bersaglio chiave, inclusi gli inibitori delle chinasi dipendenti da ciclina. L'apoptosi mediata da p53 prevede la stimolazione dell'espressione dell'antigene BAX e FAS o la repressione di Bcl-2, e la sua attività pro-apoptotica è modulata dalle interazioni con le proteine della famiglia ASPP. Inoltre, p53 regola l'orologio circadiano reprimendo la trascrizione di PER2 mediata da CLOCK-BMAL1. Riferimenti correlati: PMID:11025664, PMID:12524540, PMID:12810724, PMID:15340061, PMID:24051492

p53 si localizza in più compartimenti subcellulari a seconda del suo stato di attivazione e dell'isoforma. È prevalentemente nucleare, ma può essere trovato nel citoplasma, nei corpi nucleari PML, nei mitocondri, nel reticolo endoplasmatico e nel centrosoma. La traslocazione nei mitocondri avviene in condizioni di stress ossidativo o dopo trattamento con mitomicina C, dove p53 collabora con PPIF per attivare la necrosi. Riferimenti correlati: PMID:15340061, PMID:17170702, PMID:11025664, PMID:12810724, PMID:22726440, PMID:27323408, PMID:28842590

p53 è espressa in modo ubiquitario, ma le sue isoforme mostrano variazioni dipendenti dal tessuto. L'isoforma 2 è assente nel cervello, polmone e prostata, mentre l'isoforma 8 è limitata a colon, midollo osseo, testicolo, cervello fetale e intestino. Riferimenti correlati: PMID:16131611

p53 subisce estese modifiche post-traduzionali che regolano la sua stabilità e attività. L'acetilazione alla lisina 382 (K382) è mediata da acetiltransferasi come p300/CBP e aumenta il legame di p53 al DNA e l'attivazione trascrizionale. Questa modificazione può essere invertita dalle deacetilasi, e K382 può anche essere metilata o dimetilata, evidenziando una rete regolatoria complessa. Riferimenti correlati: PMID:10656795, PMID:15448695, PMID:20228809, PMID:23431171, PMID:29681526, PMID:19608861, PMID:17707234, PMID:20870725, PMID:22864287

Guida sperimentale e consigli tecnici

• L'immunogeno è un peptide acetilato sintetico corrispondente ai residui intorno alla K382 della p53 umana. Si prevede che l'anticorpo riconosca specificamente la forma acetilata; la reattività crociata con il peptide non modificato o con altre modifiche in questo sito deve essere verificata sperimentalmente.
• Per applicazioni di dot blot, si consiglia l'uso di campioni di proteine denaturate o peptidi spotted su membrane. Per ELISA, può essere adatto il rivestimento con il peptide immunogeno o la proteina p53 full-length.
• Poiché gli anticorpi policlonali possono presentare variazioni da lotto a lotto, convalidare la specificità dell'anticorpo nel vostro sistema sperimentale utilizzando controlli appropriati (ad esempio, competizione con peptide non acetilato, o lisati da cellule trattate con inibitori delle deacetilasi come la trichostatina A).
• L'induzione dell'acetilazione di p53 può essere ottenuta trattando le cellule con agenti dannosi per il DNA (ad esempio doxorubicina, etoposide) prima della preparazione dei campioni.
• L'anticorpo viene spedito in borse del ghiaccio. Dopo il ricevimento, aliquotare e conservare a –20°C o temperature più basse per una stabilità a lungo termine. Evitare ripetuti cicli di congelamento e scongelamento.

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