Anticorpo Policlonale Anti-53BP1 per WB, IHC-P, ELISA - Q12888

Specifiche e Parametri Principali del Prodotto

Contesto Biologico: Funzione e Localizzazione della Proteina Legante TP53 1

• 53BP1, nota anche come p202, TDRD30 o p53BP1, è una proteina chiave nella riparazione delle rotture a doppio filamento (DSB) coinvolta nella risposta al danno al DNA, nella dinamica dei telomeri e nella ricombinazione di scambio di classe (CSR) durante la genesi degli anticorpi. Riferimenti correlati: PMID:12364621 PMID:17190600 PMID:21144835

• Promuove la riparazione delle DSB mediata dalla giunzione non omologa delle estremità (NHEJ) e contrasta specificamente la riparazione per ricombinazione omologa (HR) dipendente da BRCA1. Riferimenti correlati: PMID:22553214 PMID:23333306 PMID:23727112

• In seguito a danno al DNA, la fosforilazione di 53BP1 mediata da ATM promuove la sua interazione con RIF1 e la dissociazione da TIRR, facilitando il reclutamento nei siti di DSB. Riferimenti correlati: PMID:28241136

• 53BP1 viene reclutata alle DSB riconoscendo l'istone H2A monoubiquitinato in K15 (H2AK15Ub) e l'istone H4 dimetilato in K20 (H4K20me2). Riferimenti correlati: PMID:17190600 PMID:23760478 PMID:27153538

• È necessaria per la ricombinazione di scambio di classe delle immunoglobuline (CSR), un processo che genera DSB del DNA. Riferimenti correlati: PMID:23345425

• 53BP1 promuove anche la NHEJ ai telomeri disfunzionali attraverso l'interazione con PAXIP1. Riferimenti correlati: PMID:23727112

• A livello subcellulare, 53BP1 si localizza nel nucleo, sui cromosomi e specificamente ai centromeri e ai cinetocori.

• Lo splicing alternativo produce molteplici isoforme di 53BP1, contribuendo alla diversità funzionale nella riparazione del DNA.

Guida Sperimentale e Consigli Tecnici

• Essendo un anticorpo policlonale generato contro un frammento ricombinante (aa 895-1031), si prevede che riconosca la proteina 53BP1 a lunghezza intera (~214 kDa) e possibilmente prodotti di degradazione nel western blot. Ottimizzare l'esposizione e i controlli di caricamento.
• Per il WB, per gli anticorpi policlonali viene spesso utilizzato un intervallo di diluizione iniziale tipico di 1:500–1:2000; tuttavia, la concentrazione di lavoro ottimale deve essere determinata empiricamente nel proprio sistema campione.
• Nell'IHC-P, potrebbe essere necessario un recupero dell'antigene a causa della localizzazione nucleare di 53BP1; convalidare la specificità della colorazione con appropriati controlli tissutali e considerare l'uso di una colorazione di contrasto nucleare.
• L'anticorpo mostra reattività incrociata con 53BP1 di topo e ratto, come confermato dal fornitore, rendendolo utile per studi traslazionali; tuttavia, dovrebbe essere considerato l'allineamento delle sequenze della regione immunogena tra le specie.
• Poiché 53BP1 è una fosfoproteina coinvolta nella segnalazione del danno al DNA, il trattamento delle cellule con agenti dannosi per il DNA (ad es. radiazioni ionizzanti, etoposide) può migliorare il rilevamento della formazione di foci nell'immunofluorescenza o modulare il segnale nel WB.
• Per l'ELISA, l'anticorpo può essere utilizzato per catturare o rilevare frammenti ricombinanti di 53BP1 o lisati cellulari; le condizioni appropriate di bloccaggio e lavaggio dovrebbero essere ottimizzate.

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