Anticorpo policlonale Anti-AK4 per WB, IP, ELISA - P27144

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di AK4

• AK4, nota anche come adenilato chinasi 3-like o GTP:AMP fosfotransferasi, è un enzima mitocondriale codificato dal gene AK4 (GeneID: 205) che appartiene alla famiglia delle adenilato chinasi.
• Funziona come nucleoside fosfato chinasi mitocondriale a ampia specificità, mantenendo l'omeostasi dei nucleotidi cellulari catalizzando le interconversioni nucleoside-fosfato. Riferimenti correlati: PMID:19073142 PMID:19766732 PMID:23416111
• AK4 fosforila preferenzialmente l'AMP in ADP utilizzando l'ATP come donatore di fosfato; può anche usare il GTP come donatore alternativo di fosfato per la fosforilazione dell'AMP. Riferimenti correlati: PMID:19766732
• In vitro, AK4 mostra una specificità del substrato più ampia, fosforila CMP, dAMP e dCMP e utilizza il GTP come donatore alternativo. Riferimenti correlati: PMID:19766732 PMID:23416111
• L'enzima possiede anche attività difosfato chinasi, generando ATP, CTP, GTP, UTP, TTP, dATP, dCTP e dGTP dai rispettivi difosfati corrispondenti. Riferimenti correlati: PMID:23416111
• AK4 svolge un ruolo fondamentale nella regolazione dei livelli di ATP cellulari modulando la fosforilazione e l'attivazione del sensore energetico AMPK. Riferimenti correlati: PMID:24767988 PMID:26980435
• Ha una funzione protettiva nella risposta cellulare allo stress ossidativo, contribuendo alla resilienza mitocondriale. Riferimenti correlati: PMID:19130895 PMID:23474458 PMID:26980435
• Subcellularmente, AK4 è localizzata nella matrice mitocondriale, coerente con il suo ruolo nel metabolismo dei nucleotidi mitocondriale.
• L'espressione tissutale è più alta nel rene, moderata nel cuore e nel fegato e bassa nel cervello, riflettendo la sua importanza nei tessuti con alto fabbisogno energetico.

Indicazioni sperimentali e consigli tecnici

• L'immunogeno corrisponde ai 223 amminoacidi N-terminali della AK4 umana, che copre il dominio conservato dell'adenilato chinasi. Questa regione è altamente omologa tra uomo e topo, supportando la reattività incrociata osservata.
• Per l'analisi Western blot (WB), utilizzare lisati di tessuto da rene o fegato come controlli positivi. Considerare una diluizione iniziale di 1:500-1:2000 e validare con marcatori di peso molecolare appropriati (~25 kDa).
• L'immunoprecipitazione (IP) può trarre vantaggio da frazioni arricchite di mitocondri per aumentare l'abbondanza del bersaglio. Ottimizzare la quantità di anticorpo e le condizioni di incubazione empiricamente.
• Per le applicazioni ELISA, rivestire con proteina AK4 ricombinante come standard e titolare l'anticorpo. L'accoppiamento con un anticorpo di rilevamento richiede una validazione accurata.
• Poiché AK4 è una proteina della matrice mitocondriale, considerare la frazionamento subcellulare o le colorazioni specifiche per organelli per aumentare la specificità del segnale.

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