Anticorpo policlonale coniglio anti-AKAP8 per WB, IF/ICC, ELISA - O43823

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione dell'AKAP8

• AKAP8, nota anche come AKAP95, è una proteina di ancoraggio A-chinasi che compartimenta la proteina chinasi dipendente da cAMP (PKA tipo II) in specifiche posizioni subcellulari, facilitando una segnalazione precisa (PubMed:9473338). Riferimenti correlati: PMID:9473338
• Agisce come impalcatura per la PKA sui cromosomi mitotici, reclutando la subunità del complesso condensina NCAPD2 per mantenere la condensazione cromosomica durante la mitosi in modo indipendente dall'ancoraggio della PKA (PubMed:10601332, PubMed:10791967, PubMed:11964380). Riferimenti correlati: PMID:10601332, PMID:10791967, PMID:11964380
• AKAP8 è coinvolta nella regolazione del ciclo cellulare facilitando la consegna della ciclina D/E a CDK4 ed è richiesta per la transizione G2/M e la deacetilazione degli istoni mitotici tramite il reclutamento di HDAC3 (PubMed:14641107, PubMed:16980585). Riferimenti correlati: PMID:14641107, PMID:16980585
• Modula la segnalazione dei recettori Toll-like, sopprimendo la produzione di TNF nella precoce attivazione dei macrofagi indotta da LPS tramite il targeting della PKA a NFKB1 (Per analogia).
• La proteina localizza in più compartimenti cellulari tra cui il nucleo, il nucleolo, la matrice nucleare e il citoplasma, consentendo funzioni dipendenti dal contesto come il rimodellamento della cromatina, la regolazione trascrizionale e la trasduzione del segnale.
• AKAP8 si lega preferenzialmente al DNA ricco di GC e si associa alla cromatina dell'RNA ribosomiale (rRNA), suggerendo un ruolo nella regolazione della trascrizione rDNA (PubMed:26683827). Riferimenti correlati: PMID:26683827
• Altamente espressa nel cuore, fegato, muscolo scheletrico, rene, pancreas e cellule dendritiche mature, riflettendo la sua ampia rilevanza fisiologica.

Guida sperimentale e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno corrisponde agli aminoacidi 480–692 dell'AKAP8 umana, una regione che include i domini a dito di zinco C-terminali; considerare che l'anticorpo può riconoscere epitopi all'interno di questa regione di legame al DNA funzionalmente rilevante.
• Per il Western blot (WB), è prevista una banda specifica a circa 76 kDa; utilizzare lisati arricchiti di nucleo da cellule umane o murine (es. HeLa, HEK293, NIH/3T3) come controlli positivi e validare con marcatori di peso molecolare.
• Nell'immunofluorescenza (IF/ICC), prevedere una colorazione nucleare punteggiata con possibile localizzazione nucleolare e citoplasmatica; si raccomanda la colorazione combinata con marcatori nucleari (es. DAPI, laminina) per la conferma.
• Per l'ELISA, possono essere applicati protocolli diretti standard o a sandwich; ottimizzare la concentrazione dell'antigene di rivestimento e la diluizione dell'anticorpo utilizzando la proteina AKAP8 ricombinante o il peptide.
• Data la reattività crociata con il topo, questo anticorpo è adatto per studi interspecie; confermare sempre la specificità tramite controlli di knockdown o knockout per garantire dati affidabili.

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