Anticorpo monoclonale di coniglio Anti-AKT1/2 per WB, IHC, ELISA - P31749 / P31751

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di AKT1/2

• AKT1 è una serina/treonina protein-chinasi appartenente alla famiglia AKT, che comprende anche AKT2 e AKT3. Agisce come regolatore chiave del metabolismo, della proliferazione, della sopravvivenza cellulare, della crescita e dell'angiogenesi (PubMed:11882383, PubMed:15526160, PubMed:15861136). Riferimenti correlati: PMID:11882383, PMID:15526160, PMID:15861136
• Fosforila un'ampia gamma di substrati a valle, con oltre 100 candidati identificati, anche se la specificità di isoforma non è ben definita per la maggior parte di essi (PubMed:11882383, PubMed:15526160, PubMed:21432781). Riferimenti correlati: PMID:11882383, PMID:15526160, PMID:21432781
• Nella segnalazione insulinica, AKT1 promuove l'assorbimento del glucosio mediando la traslocazione del trasportatore GLUT4 sulla superficie cellulare e regola la sintesi del glicogeno inibendo GSK3α e GSK3β (per similarità).
• AKT1 promuove la sopravvivenza cellulare fosforilando e inibendo fattori pro-apoptotici: MAP3K5 alla Ser-83 (PubMed:11154276), BAD (PubMed:10926925) e i fattori di trascrizione FOXO, portando al loro sequestro citoplasmatico (PubMed:10358075). Riferimenti correlati: PMID:11154276, PMID:10926925, PMID:10358075
• È un componente centrale della via PI3K/AKT/mTOR, attiva mTORC1 tramite fosforilazione di TSC2 (PubMed:12150915, PubMed:12172553) e modula l'attività di mTORC2 tramite fosforilazione di MAPKAP1/SIN1 (per similarità). Riferimenti correlati: PMID:12150915, PMID:12172553
• AKT1 si localizza nel citoplasma, nel nucleo, sulla membrana cellulare e nello spazio intermembrana mitocondriale, riflettendo il suo coinvolgimento in diversi comparti di segnalazione.
• È espresso ubiquitariamente nelle cellule umane, con espressione e attivazione elevate in tumori come la prostata e la mammella, dove la fosforilazione della Tyr-176 aumenta durante la progressione.
• Le modifiche post-traduzionali, tra cui fosforilazione, acetilazione, ubiquitinazione e glicosilazione, regolano strettamente l'attività, la stabilità e le interazioni di AKT1.

Guida sperimentale e consigli tecnici

• Il peptide immunogeno copre gli amminoacidi 381-480 di AKT1 umano (P31749), una regione prevista come conservata in AKT2; pertanto, l'anticorpo può riconoscere sia AKT1 che AKT2. Si consiglia di verificare la specificità di isoforma nel proprio sistema sperimentale.
• Per Western blot (WB), l'anticorpo rileva una banda intorno ai 56 kDa. Validare il peso molecolare utilizzando lisati di controllo positivo (ad esempio HeLa, NIH/3T3) e appropriati controlli di caricamento.
• Per l'immunohistochimica (IHC-P), garantire un appropriato recupero dell'antigene e validare i pattern di colorazione utilizzando sezioni di tessuto note per esprimere AKT1/2, come i tessuti di cancro alla prostata o alla mammella.
• Per ELISA, si consiglia di accoppiare l'anticorpo con un anticorpo di rivelazione diretto contro un epitopo differente per lo sviluppo di un ELISA sandwich. Ottimizzare le condizioni di rivestimento e bloccaggio.
• Poiché AKT1/2 vengono fosforilati dopo l'attivazione, questo anticorpo rileva l'AKT totale; per studi specifici sull'attivazione, accoppiarlo con anticorpi fosfo-specifici.

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