Anticorpo policlonale di coniglio Anti-ALG13 per WB, ELISA - Q9NP73

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di ALG13

• ALG13 è la subunità catalitica del complesso UDP-N-acetilglucosamina transferasi, noto anche come omologo 13 della glicosilazione legata all'asparagina o proteina 1 con dominio glicosiltransferasi 28. Meda il secondo passo della biosintesi dell'oligosaccaride legato al dolicholo sulla faccia citoplasmatica del reticolo endoplasmatico.
• Insieme al suo partner obbligatorio ALG14, ALG13 forma un complesso dimero che trasferisce un N‑acetilglucosamina (GlcNAc) legato in β1,4 da UDP‑GlcNAc a GlcNAc‑pirofosfato dolicholo, generando N,N′‑diacetilchitobiosil difosfodolicolo. Questo intermedio viene successivamente allungato da ALG1 e da altre glicosiltransferasi.
• Il complesso ALG13/ALG14 è ancorato alla membrana del reticolo endoplasmatico, dove il precursore dell'oligosaccaride legato al dolicholo viene assemblato prima di essere riversato nel lume del RE per ulteriori lavorazioni e il successivo trasferimento ai polipeptidi nascenti.
• Sebbene annotato come potenziale enzima multifunzionale basandosi sui motivi di sequenza (domini tiolproteasi e idrolasi, non è stata rilevata attività glicosiltransferasi o deubiquitinasi per ALG13 al di fuori del suo ruolo nel trasferimento di GlcNAc. Le sue attività biochimiche aggiuntive, se esistono, rimangono scarsamente caratterizzate.
• Le mutazioni nel gene ALG13 sono associate al disturbo congenito della glicosilazione di tipo Is (CDG1S) e alle encefalopatie epilettiche della prima infanzia (DEE36, EIEE36), che riflettono l'importanza critica di questo enzima nel normale neurosviluppo e nella N-glicosilazione globale delle proteine.
• L'alternative splicing genera più isoforme di ALG13, e la proteina è soggetta a ubiquitinazione (via di coniugazione Ubl), che può regolarne la stabilità o la funzione.

Indicazioni sperimentali e consigli tecnici

• L'immunogeno utilizzato è un peptide sintetico che comprende i residui 100–167 di ALG13 umano (isoforma NP_001311219.1). Questo epitopo è conservato in ALG13 di topo, supportando la reattività crociata osservata con campioni di topo.
• Per il Western blotting, validare la specificità dell'anticorpo includendo controlli positivi come linee cellulari umane o di topo note per esprimere ALG13, e considerare esperimenti di silenziamento con siRNA o sovraespressione per confermare la banda a ~126 kDa.
• Per studiare il complesso funzionale ALG13/ALG14, prendere in considerazione saggi di co-immunoprecipitazione o di proximity ligation abbinati alla rilevazione di entrambe le subunità.
• Nelle applicazioni ELISA, utilizzare la proteina ricombinante ALG13 o il peptide immunogeno come antigene di rivestimento per stabilire curve standard, e titolare appropriatamente l'anticorpo per ottenere un rapporto segnale/rumore ottimale.
• Poiché ALG13 è una proteina associata alla membrana, assicurarsi che i buffer di lisi contengano detergenti adeguati (ad esempio 1% Triton X‑100 o NP‑40) per solubilizzare in modo efficiente la frazione di membrana del reticolo endoplasmatico.

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