Anticorpo policlonale coniglio anti-ALKBH1 per WB, IF/ICC, IP, ELISA - Q13686

Specifiche principali del prodotto e parametri

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di ALKBH1

• ALKBH1 è una diossigenasi degli acidi nucleici che agisce su DNA e tRNA, richiedendo ossigeno molecolare, alfa-chetoglutarato e ferro come cofattori. Riferimenti correlati: PMID:18603530 PMID:27497299
• Funziona principalmente come demetilasi del tRNA, rimuovendo la N1-metiladenina da vari tRNA, con preferenza per la posizione 58 (m1A58) nel T-loop, regolando così l'inizio e l'allungamento della traduzione. Riferimenti correlati: PMID:27745969
• Nelle mitocondri, ALKBH1 ossida il mt-tRNA(Met) alla citosina(34) a 5-formilcitosina, espandendo il riconoscimento del codone per leggere AUA oltre ad AUG. Riferimenti correlati: PMID:27497299
• ALKBH1 demetila anche la N6-metiladenina nel DNA, in particolare agli elementi ripetitivi L1 nelle cellule staminali embrionali, contribuendo al silenzioso. Riferimenti correlati: PMID:30017583 PMID:30392959
• ALKBH1 mostra attività DNA liasi, clivando siti abasici nel DNA, il che genera addotti proteina-DNA covalenti; questa attività non richiede alfa-chetoglutarato. Riferimenti correlati: PMID:19959401 PMID:23577621
• La proteina localizza sia nel nucleo che nei mitocondri.
• ALKBH1 è espresso ubiquitariamente nei tessuti umani.

Guida sperimentale e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno corrisponde agli amminoacidi 110-389 dell'ALKBH1 umano, una regione che comprende il dominio catalitico. Questa progettazione può conferire una forte reattività contro la proteina a lunghezza intera.
• Per il Western blot, il peso molecolare previsto è 44 kDa. Potrebbero apparire bande aggiuntive dovute a splicing alternativo, modificazioni post-traduzionali o rilevamento di omologhi come il murino Alkbh1.
• Nell'immunofluorescenza/immunocitochimica, prevedere una colorazione sia nei compartimenti nucleari che mitocondriali, coerente con la doppia localizzazione di ALKBH1.
• Quando si esegue l'immunoprecipitazione, notare che ALKBH1 interagisce con gli acidi nucleici; includere il trattamento con nucleasi se necessario.
• Le prestazioni ELISA devono essere validate utilizzando l'antigene ricombinante o lisati di cellule/tessuti rilevanti; considerare gli effetti della matrice in campioni complessi.
• È prevista la reattività crociata con l'ALKBH1 murino, ma confermare l'identità della sequenza nella regione dell'immunogeno per altre specie se necessario.

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