Anticorpo monoclonale di coniglio anti-ALKBH5 per WB, ELISA - Q6P6C2

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di ALKBH5

• ALKBH5 catalizza la demetilazione ossidativa dell'm6A nell'RNA, una reazione dipendente dall'ossigeno molecolare, dall'alfa-chetoglutarato e dal ferro, invertendo così la modifica m6A sull'mRNA.
  Riferimenti correlati: PMID:21264265 PMID:23177736 PMID:24489119
• Attraverso la sua attività di demetilasi, ALKBH5 modula l'elaborazione, la traduzione e l'esportazione dell'mRNA, rappresentando un regolatore critico dell'epitrascrittoma.
  Riferimenti correlati: PMID:23177736 PMID:34048572 PMID:36944332
• ALKBH5 è anche in grado di demetilare l'N(6)-metiladenosina nel DNA a singolo filamento in vitro, suggerendo un potenziale di substrato più ampio.
  Riferimenti correlati: PMID:24616105
• Svolge un ruolo essenziale nella spermatogenesi, essendo necessario per le fasi meiotiche tardive e aploidi; la demetilazione m6A da parte di ALKBH5 negli spermatociti e negli spermatidi rotondi garantisce il corretto splicing e la produzione di mRNA con 3'-UTR più lunghi nelle cellule germinali maschili.
• ALKBH5 partecipa all'assemblaggio delle paraspeckle, un organello nucleare privo di membrana, attraverso la separazione di fase liquido-liquido, con la sua attività di demetilasi sull'RNA non codificante NEAT1 che è parte integrante di questo processo.
  Riferimenti correlati: PMID:37369679 PMID:37474102
• Come regolatore negativo dello sviluppo delle cellule T, ALKBH5 inibisce la proliferazione delle cellule T gamma-delta demetilando i trascritti JAG1 e NOTCH2, e sopprime il reclutamento delle cellule T regolatorie tramite la destabilizzazione dell'mRNA di CCL28.
• A livello subcellulare, ALKBH5 si localizza nelle speckle nucleari e nel nucleoplasma, coerentemente con le sue funzioni nell'elaborazione dell'RNA e nelle dinamiche dei corpi nucleari.
• L'acetilazione, la fosforilazione e la coniugazione con ubiquitina sono tra le modifiche post-traduzionali annotate per ALKBH5, che possono regolarne la stabilità e l'attività.

Guida sperimentale e consigli tecnici

• L'immunogeno (amminoacidi 66-394 dell'ALKBH5 umano) copre una gran parte della proteina; si consiglia di verificare la specificità in modelli knockout o knockdown per applicazioni critiche.
• Per il Western blotting, è prevista una banda a circa 44 kDa; utilizzare lisati di tessuti con elevata espressione di ALKBH5 (es. polmone, testicolo) come controlli positivi.
• Nell'ELISA, ottimizzare la concentrazione dell'antigene di rivestimento e la diluizione dell'anticorpo per ottenere una rilevazione lineare e ridurre al minimo il background.
• Data la localizzazione nucleare dell'enzima, confermare che i protocolli di lisi ed estrazione siano adeguati durante la preparazione dei lisati per la rilevazione.

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