Anticorpo policlonale anti-AMBRA1 da coniglio per WB e ELISA - Q9C0C7

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di AMBRA1

• AMBRA1 è la componente di riconoscimento del substrato di un complesso E3 ubiquitina-protein ligasi DCX (DDB1-CUL4-X-box), che media la poliubiquitinazione di proteine bersaglio coinvolte nella progressione del ciclo cellulare e nell'autofagia. Riferimenti bibliografici: PMID:20921139, PMID:23524951, PMID:24587252
• Agisce come regolatore principale a monte della transizione G1/S riconoscendo la cicchina D fosforilata (CCND1, CCND2, CCND3) e indirizzandola verso la degradazione ubiquitina-dipendente, agendo quindi come oncosoppressore. Riferimenti bibliografici: PMID:33854232, PMID:33854235, PMID:33854239
• È un regolatore chiave dell'autofagia; dopo l'induzione autofagica, viene rilasciato dal citoscheletro per mediare l'ubiquitinazione legata a Lisina-63 di BECN1 e ULK1, aumentando l'attività di PIK3C3 e la stabilità di ULK1 per promuovere la formazione degli autofagosomi. Riferimenti bibliografici: PMID:20921139, PMID:23524951
• Promuove la mitofagia interagendo con PRKN e le proteine della famiglia LC3 per indirizzare i mitocondri danneggiati verso gli autofagosomi, e agisce come cofattore per l'ubiquitinazione di MFN2 mediata da HUWE1. Riferimenti bibliografici: PMID:21753002, PMID:25215947, PMID:30217973
• Indipendentemente dalla sua funzione di E3 ligasi, AMBRA1 regola la stabilità di MYC e FOXO3 attraverso l'interazione con la fosfatasi proteica 2A (PPP2CA), portando alla degradazione di MYC e alla stabilizzazione di FOXO3, influenzando quindi la proliferazione cellulare e la differenziazione dei linfociti T regolatori. Riferimenti bibliografici: PMID:25438055, PMID:25803737, PMID:30513302
• La localizzazione subcellulare include citoplasma, citoscheletro, reticolo endoplasmatico, autofagosomi, mitocondri, nucleo e adesioni focali, che riflette i suoi molteplici ruoli nel traffico cellulare e nella segnalazione.
• È modificato post-traduzionalmente da metilazione e fosforilazione, contiene ripetizioni WD; è anche coinvolto nell'assemblaggio di catene poliubiquitiniche legate a Lisina-63, fondamentali per la trasduzione del segnale.

Indicazioni sperimentali e consigli tecnici

• L'immunogeno corrisponde agli amminoacidi 961–1208 di AMBRA1 umano; pertanto l'anticorpo riconosce probabilmente epitopi all'interno di questa regione. Nel Western blot è attesa una banda a circa 143 kDa. Si consiglia di ottimizzare le condizioni di blocco e lavaggio per ridurre al minimo il fondo.
• La reattività crociata confermata verso il topo rende questo anticorpo adatto per studi su modelli murini; tuttavia, è necessario convalidare la rilevazione nel specifico tessuto o tipo cellulare di interesse per garantire specificità e sensibilità.
• Per applicazioni ELISA, le condizioni di pre-rivestimento e i sistemi di rilevamento devono essere ottimizzati empiricamente; si consiglia di utilizzare proteina AMBRA1 ricombinante o lisati cellulari come antigeni di rivestimento.
• A causa dello splicing alternativo, possono esistere più isoforme di AMBRA1 in alcuni tipi cellulari; verificare il pattern di bande rilevato rispetto ai controlli noti nel proprio sistema sperimentale.
• Questo anticorpo policlonale può essere utilizzato per immunoprecipitazione o immunofluorescenza previa validazione aggiuntiva; il legame non specifico con altre proteine contenenti ripetizioni WD è improbabile ma deve essere escluso mediante controlli appropriati.

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