Anticorpo monoclonale di coniglio anti-APAF1 per WB ed ELISA - O14727

Specifiche e Parametri Principali del Prodotto

Contesto Biologico: Funzione e Localizzazione di APAF1

• APAF1 (Fattore 1 attivatore della proteasi apoptotica), noto anche come CED4 o APAF-1, è codificato dal gene APAF1 (KIAA0413) ed esiste in più isoforme a causa dello splicing alternativo.
• La proteina funge da componente centrale dell'apoptosoma, dove APAF1 oligomerico media l'attivazione autoproteolitica dipendente dal citocromo c della pro-caspasi-9, attivando successivamente la caspasi-3 per eseguire l'apoptosi; questo processo richiede il legame dell'ATP.
• APAF1 è una proteina multi-dominio contenente un dominio di reclutamento della caspasi (CARD) N-terminale, un dominio centrale di legame nucleotidico e oligomerizzazione (NOD) e regioni C-terminali a ripetizione WD40 critiche per il legame del citocromo c.
• A livello subcellulare, APAF1 risiede prevalentemente nel citoplasma in condizioni normali e, dopo l'induzione dell'apoptosi, si trasloca nel complesso dell'apoptosoma.
• L'espressione è ubiquitaria, con i livelli più alti rilevati nella milza adulta, nei leucociti del sangue periferico, nel cervello fetale, nel rene e nel polmone; l'isoforma 1 si trova specificamente nel cuore, nel rene e nel fegato.
• La proteina è soggetta a regolazione mediata dal legame ATP/dATP e probabilmente dal calcio, come indicato dalle associazioni di parole chiave, e presenta ripetizioni WD essenziali per le interazioni proteina-proteina.
• Parole chiave: Struttura 3D, Splicing alternativo, Apoptosi, Legame ATP, Calcio, Citoplasma, Sequenziamento proteico diretto, Legame nucleotidico, Identificazione proteomica, Proteoma di riferimento, Ripetizione, Ripetizione WD.

Guida Sperimentale e Consigli Tecnici

• L'immunogeno corrisponde agli amminoacidi 470-600 di APAF1 umana (regione centrale NOD), garantendo il rilevamento delle varianti a lunghezza intera e troncate, ma la specificità dovrebbe essere verificata in modelli cellulari rilevanti.
• Per il Western blot, considerare che APAF1 migra a pesi molecolari multipli (38-142 kDa) a causa della diversità delle isoforme e del clivaggio da parte delle caspasi; il pattern delle bande può variare in base al tipo cellulare e agli stimoli apoptotici.
• Le applicazioni ELISA possono essere sviluppate utilizzando una curva standard di APAF1 ricombinante; includere controlli positivi appropriati (ad es. lisati di Jurkat trattati con staurosporina) e controlli negativi per validare la specificità del saggio.
• È attesa una reattività crociata con APAF1 murina in base all'omologia di sequenza, ma si raccomanda una conferma empirica in tessuti o linee cellulari murini.
• Si consiglia l'ottimizzazione della diluizione dell'anticorpo, delle condizioni di incubazione e dei reagenti di rilevamento per ogni sistema sperimentale.

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