Anticorpo policlonale anti-APEX1/APE1 per WB, IF/ICC, ELISA - P27695

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: funzione e localizzazione di APEX1/APE1

• APEX1 è una proteina multifunzionale con due attività principali: la riparazione del DNA attraverso la funzione di endonucleasi AP (apurina/apirimidina) nella riparazione per escissione di basi (BER) e la regolazione redox di fattori di trascrizione come FOS/JUN (complesso AP-1). Riferimenti correlati: PMID:11118054 PMID:11452037 PMID:15831793
• L'attività di endonucleasi AP catalizza l'incisione idrolitica dello scheletro fosfodiesterico nei siti AP del DNA, negli ibridi DNA/RNA e nell'RNA a singolo filamento, generando una rottura a singolo filamento con estremità 5'-fosfato di desossiribosio e 3'-idrossile. Riferimenti correlati: PMID:15380100 PMID:16617147 PMID:18439621
• Possiede attività di esodeossiribonucleasi 3'-5' sui nucleotidi non appaiati e attività di 3'-fosfodiesterasi del DNA, rimuovendo lesioni ossidative come il fosfoglicolato e la 8-ossoguanina. Riferimenti correlati: PMID:11832948 PMID:1719477 PMID:7516064
• APEX1 partecipa alla ricombinazione di classe delle immunoglobuline elaborando i siti AP nelle regioni switch, causando rotture a doppio filamento del DNA risolte mediante giunzione delle estremità non omologhe.
• Agisce come endoribonucleasi coinvolta nel controllo di qualità dell'RNA e nel turnover dell'mRNA, inclusa la regolazione della stabilità dell'mRNA di MYC. Riferimenti correlati: PMID:19188445 PMID:19401441 PMID:21762700
• La proteina si localizza in diversi compartimenti subcellulari: nucleo (inclusi nucleolo e speckles), citoplasma, mitocondri e reticolo endoplasmatico, riflettendo le sue diverse funzioni.
• Le principali modifiche post-traduzionali includono acetilazione, fosforilazione, S-nitrosilazione e ubiquitinazione; l'acetilazione in Lys-6/7 stimola l'attività del promotore MDR1, contribuendo alla resistenza ai farmaci. Riferimenti correlati: PMID:18809583
• APEX1 svolge un ruolo nella demetilazione del DNA, contribuendo alla regolazione epigenetica dell'espressione genica. Riferimenti correlati: PMID:21496894

Indicazioni sperimentali e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno è una proteina ricombinante che comprende gli amminoacidi 1-318 di APEX1 umano (a lunghezza completa), suggerendo che l'anticorpo possa riconoscere sia le forme native sia quelle denaturate. Per il WB, è prevista una banda intorno a 36 kDa; utilizzare controlli positivi appropriati (ad esempio lisati cellulari di HeLa o HEK293) e, se necessario, validare mediante knockdown con siRNA.
• Per IF/ICC, prevedere una colorazione nucleare e possibilmente citoplasmatica o mitocondriale. La doppia colorazione con marcatori degli organelli (ad esempio laminina per il nucleo, MitoTracker per i mitocondri) può aiutare a confermare la specificità.
• Nelle applicazioni ELISA, considerare il rivestimento con proteina APEX1 ricombinante come standard e testare un intervallo di concentrazioni per ottimizzare la sensibilità.
• Dato il ruolo di APEX1 nella BER, l'anticorpo può essere utile per rilevare variazioni dell'espressione in condizioni di stress ossidativo; includere controlli pertinenti (ad esempio cellule trattate con H₂O₂) per correlare i risultati con le vie di risposta al danno del DNA.
• La reattività crociata è stata validata per l'uomo; per altre specie, verificare l'omologia di sequenza ed eseguire esperimenti pilota.

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