Anticorpo policlonale coniglio Anti-APLF per WB, ELISA - Q8IW19

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di APLF

• APLF agisce come chaperone di istoni essenziale per la riparazione delle rotture del DNA a singolo e doppio filamento.
  Riferimenti bibliografici: PMID:17353262, PMID:17396150, PMID:21211721
• Viene reclutato nei siti di danno del DNA legando catene ramificate di poli-ADP-ribosio, dove promuove l'espulsione degli istoni e il reclutamento della variante istonica MACROH2A1.
  Riferimenti bibliografici: PMID:21211722, PMID:29905837, PMID:30104678
• APLF possiede attività di apurinica-apirimidinica (AP) endonucleasi e 3'-5' esonucleasi e può introdurre nick presso l'idrouracile e altri danni alle basi pirimidiniche in vitro.
  Riferimenti bibliografici: PMID:17353262, PMID:17396150
• Nella via di riparazione non omologa delle estremità (NHEJ), APLF collabora con PARP3 per trattenere il complesso LIG4-XRCC4 sulla cromatina, accelerando la legazione del DNA.
  Riferimenti bibliografici: PMID:21211721, PMID:23689425
• APLF regola negativamente la pluripotenza cellulare promuovendo lo scambio istonico ed è necessario per l'impianto embrionale durante la transizione epiteliale-mesenchimale nelle femmine.
• Subcellularmente, APLF si localizza nel nucleo, nei cromosomi e nel citoplasma/citosole, in linea con le sue funzioni di riparazione del DNA e regolazione della cromatina.
• I motivi strutturali includono un dominio FHA, ripetizioni di zinco-finger e siti per fosforilazione e ADP-ribosilazione, che evidenziano il suo ruolo nelle risposte dipendenti da segnale al danno del DNA.

Guida sperimentale e consigli tecnici

• Per il Western blot, aspettatevi una banda vicino a 57 kDa in campioni di origine umana; includete un controllo positivo come l'immunogeno ricombinante (aa 200-380) per confermare la rilevazione.
• Poiché è stata osservata reattività crociata con il ratto, validate l'anticorpo in lisati cellulari o tissutali di ratto se la vostra ricerca coinvolge modelli di roditori.
• Per applicazioni ELISA, la copertura con il frammento ricombinante di APLF può migliorare la specificità del segnale; le condizioni di saggio devono essere ottimizzate empiricamente.
• Data la localizzazione nucleare e citoplasmatica di APLF, prendete in considerazione la frazionamento subcellulare per arricchire il bersaglio e ottenere una rilevazione più sensibile in WB.
• Poiché APLF è coinvolto nel danno del DNA, il trattamento con agenti dannosi per il DNA può aumentare il reclutamento proteico sulla cromatina; esperimenti a tempo possono rivelare cambiamenti dinamici di localizzazione.

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