Anticorpo policlonale di coniglio anti-APOA1 per WB, IHC-P, ELISA - P02647

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: funzione e localizzazione dell'apolipoproteina A-I

• L'apolipoproteina A-I (ApoA-I) è il principale componente proteico delle lipoproteine ad alta densità plasmatiche (HDL) ed è presente anche nei chilomicroni, svolgendo un ruolo centrale nell'omeostasi del colesterolo.
• Media il trasporto inverso del colesterolo promuovendo l'efflusso del colesterolo dai tessuti periferici e agendo come cofattore essenziale per la lecitina-colesterolo aciltransferasi (LCAT), che esterifica il colesterolo per il suo confezionamento nelle particelle HDL.
• L'ApoA-I è una proteina secreta sintetizzata principalmente nel fegato e nell'intestino tenue, quindi rilasciata nella circolazione, dove si associa alle particelle lipidiche.
• Il gene APOA1 appartiene al cluster genico dell'apolipoproteina A1/C3/A4/A5 sul cromosoma 11 e codifica una preproproteina che subisce un processamento proteolitico per produrre la proteina matura di 243 amminoacidi.
• Le modifiche post-traduzionali includono l'ossidazione di Met-110 e Met-136, che risulta aumentata negli individui con fattori di rischio per la malattia coronarica, come il fumo e le varianti del gene eNOS; la proteina può inoltre essere glicata, nitratata e palmitoilata.
• L'ApoA-I è coinvolta nell'amiloidosi, in cui alcune varianti formano fibrille amiloidi, e nell'aterosclerosi, in cui le forme ossidate sono arricchite nelle lesioni aortiche e correlano con la gravità della malattia.
• Come parte del complesso SPAP, l'ApoA-I attiva la motilità degli spermatozoi, indicando una funzione extraepatica oltre al trasporto lipidico.
• L'importanza della proteina nel metabolismo lipidico è sottolineata dalla sua associazione con i livelli di HDL e le malattie cardiovascolari, rendendola un biomarcatore e un bersaglio terapeutico chiave.

Indicazioni sperimentali e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno comprende gli amminoacidi 25–267, corrispondenti alla forma secreta matura dell'ApoA-I umana; si consiglia di verificare la reattività verso la proteina endogena in campioni biologici pertinenti (ad es. siero, plasma o lisati epatici).
• Per il Western blot, il peso molecolare previsto è di circa 28 kDa; una banda di dimensioni prossime a questo valore in campioni umani, murini e di ratto conferma la reattività crociata. Ottimizzare la preparazione dei campioni per ridurre l'interferenza dei lipidi quando si utilizza plasma o siero.
• Nell'immunoistochimica (IHC-P), testare l'anticorpo su sezioni di fegato o di tessuto arterioso aterosclerotico incluso in paraffina, utilizzando un recupero antigenico appropriato, poiché l'ApoA-I è extracellulare e potrebbe richiedere condizioni di recupero delicate.
• Per l'ELISA, validare la coppia di anticorpi in formato sandwich se utilizzata come reagente di cattura o di rilevazione; la natura policlonale può fornire un'amplificazione del segnale, ma richiede una titolazione accurata.
• Quando si lavora con forme ossidate dell'ApoA-I, tenere presente che l'ossidazione della metionina può alterare il riconoscimento dell'epitopo; si raccomandano agenti riducenti e campioni freschi.

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