Anticorpo policlonale di coniglio anti-ApoB (WB, IF/ICC, ELISA) - P04114

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: funzione e localizzazione dell'apolipoproteina B-100

• L'apolipoproteina B (ApoB) è un componente proteico principale dei chilomicroni (apoB-48), delle LDL (apoB-100) e delle VLDL (apoB-100). ApoB-48 e apoB-100 derivano dallo stesso gene tramite editing dell'RNA.
• ApoB-100 funge da segnale di riconoscimento per il legame cellulare e l'internalizzazione delle particelle LDL da parte del recettore apoB/E, svolgendo un ruolo fondamentale nell'omeostasi del colesterolo.
• A livello subcellulare, ApoB-100 si localizza nel citoplasma, viene secreta e si associa alle goccioline lipidiche, riflettendo il suo ruolo nell'assemblaggio e nella secrezione delle lipoproteine.
• Le modificazioni post-traduzionali includono acetilazione, formazione di ponti disolfuro, glicosilazione, palmitoilazione e fosforilazione, che possono regolarne la funzione e la stabilità.
• ApoB-100 contiene domini di legame all'eparina ed è coinvolta nell'aterosclerosi, rappresentando quindi un bersaglio chiave nella ricerca sulle malattie cardiovascolari.

Linee guida sperimentali e suggerimenti tecnici

• Per il Western blot (WB): a causa dell'elevato peso molecolare (~516 kDa), utilizzare gel di poliacrilammide a bassa percentuale (ad es. 4–6%) e tempi di trasferimento prolungati, con una quantità ridotta di metanolo nel tampone di trasferimento, per garantire un trasferimento efficiente.
• Per l'immunofluorescenza/immunocitochimica (IF/ICC): è necessario ottimizzare le condizioni di fissazione e permeabilizzazione, poiché ApoB è sia citoplasmatica sia secreta; una combinazione di permeabilizzazione con Triton X-100 e fissazione con paraformaldeide può essere efficace.
• Per l'ELISA: l'immunogeno ricombinante (amminoacidi 28-330) può fungere da utile controllo positivo; si consiglia di testare un intervallo di diluizioni dell'anticorpo per ottenere un rapporto segnale/rumore ottimale.
• Validare la reattività crociata dell'anticorpo con campioni di topo e ratto utilizzando lisati di tessuti o cellule appropriati, data l'elevata omologia di sequenza.

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