Anticorpo monoclonale anti-APOE per WB, IF/ICC, ELISA - P02649

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: funzione e localizzazione di APOE

• APOE (apolipoproteina E) è un componente fondamentale delle lipoproteine plasmatiche e svolge principalmente un ruolo nel trasporto dei lipidi mediato dalle lipoproteine tra gli organi attraverso il plasma e i liquidi interstiziali; è inoltre coinvolta nella produzione, conversione e clearance dei chilomicroni e delle particelle VLDL, IDL e HDL (PubMed:14754908, PubMed:1911868, PubMed:6860692, PubMed:1917954). Riferimenti correlati: PMID:14754908, PMID:1911868, PMID:6860692, PMID:1917954

• APOE si lega ai recettori cellulari, tra cui LDLR, LRP1, LRP2, LRP8 e VLDLR, mediando l'assorbimento delle particelle lipoproteiche contenenti APOE; possiede inoltre attività di legame all'eparina, che favorisce la cattura sulla superficie cellulare tramite proteoglicani eparan-solfato (PubMed:12950167, PubMed:1530612, PubMed:1917954, PubMed:23676495, PubMed:7635945, PubMed:9395455). Riferimenti correlati: PMID:12950167, PMID:1530612, PMID:1917954, PMID:23676495, PMID:7635945, PMID:9395455

• Svolge un ruolo fondamentale nel trasporto inverso del colesterolo partecipando alla biogenesi delle HDL mediata da ABCA1 e mediando l'assorbimento epatico delle HDL, contribuendo così all'omeostasi del colesterolo (PubMed:14754908, PubMed:23620513, PubMed:9395455). Riferimenti correlati: PMID:14754908, PMID:23620513, PMID:9395455

• Nel sistema nervoso centrale, APOE è importante per il trasporto dei lipidi, regola la sopravvivenza e la crescita dei neuroni e può influenzare la patogenesi della malattia di Alzheimer attraverso la regolazione trascrizionale dell'APP dipendente dai recettori (PubMed:25173806, PubMed:8939961, PubMed:28111074). Riferimenti correlati: PMID:25173806, PMID:8939961, PMID:28111074

• APOE è secreta e si trova nello spazio extracellulare, nella matrice extracellulare e nei corpi multivescicolari endosomiali; è prodotta principalmente dagli epatociti del fegato, ma anche nel cervello (astrociti, neuroni), nella ghiandola surrenale, nei reni, nella milza e nel tessuto adiposo (PubMed:25173806, PubMed:10027417, PubMed:3115992). Riferimenti correlati: PMID:25173806, PMID:10027417, PMID:3115992

• APOE è coinvolta nelle risposte immunitarie innate e adattative, legandosi al recettore delle cellule immunitarie LILRB4 e controllando la sopravvivenza delle cellule soppressorie di derivazione mieloide; partecipa inoltre all'infezione da HCV interagendo con la glicoproteina E2 dell'involucro virale (PubMed:30333625, PubMed:25122793, PubMed:29695434). Riferimenti correlati: PMID:30333625, PMID:25122793, PMID:29695434

• Le modifiche post-traduzionali includono glicosilazione, fosforilazione e ossidazione; APOE è suscettibile alla glicazione e le sue varianti sono associate a iperlipidemia e malattia di Alzheimer.

Indicazioni sperimentali e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno è una proteina ricombinante che comprende gli amminoacidi 19-317 dell'APOE umano e copre la maggior parte della proteina matura, inclusa la regione di legame al recettore. Questo design può consentire all'anticorpo di riconoscere le conformazioni di APOE sia priva sia legata ai lipidi.
• Nel Western blot, APOE viene rilevata a un peso molecolare apparente di circa 36 kDa; si consiglia di validare l'anticorpo in campioni di fegato, cervello o plasma, dove APOE è altamente espressa. Utilizzare condizioni riducenti appropriate, poiché APOE può formare complessi legati da ponti disolfuro.
• Nell'immunofluorescenza/ICC, si noti che APOE è principalmente secreta; potrebbe essere necessario ottimizzare la fissazione e la permeabilizzazione per visualizzare le frazioni intracellulari, ed è consigliata la co-colorazione con marcatori degli organelli, ad esempio del reticolo endoplasmatico, dell'apparato di Golgi o degli endosomi.
• Per l'ELISA, APOE può essere quantificata nel siero/plasma o nei surnatanti di colture cellulari; tuttavia, gli elevati livelli endogeni nel siero possono richiedere l'ottimizzazione della diluizione e un'attenta generazione della curva standard.
• Considerato il ruolo delle isoforme di APOE nelle patologie, i ricercatori possono prendere in considerazione una validazione specifica per isoforma se l'anticorpo riconosce epitopi comuni; questo anticorpo è stato prodotto contro la sequenza di riferimento (NP_000032.1), corrispondente all'isoforma APOE3.

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