Anticorpo policlonale di coniglio Anti-APP (validato KO) per WB, ELISA - P05067

Specifiche principali del prodotto e parametri

Contesto biologico: Funzione e localizzazione dell'APP

• La proteina precursore della beta-amiloide (APP) è una glicoproteina transmembrana con diversi isoforme generati tramite splicing alternativo; l'isoforma neuronale principale è APP695, mentre APP751 e APP770 sono espresse in cellule non neuronali e l'appicana è espressa negli astrociti.
• L'APP funge da recettore di superficie cellulare coinvolto nella crescita dei neuriti, nell'adesione neuronale e nell'assonogenesi; le interazioni tra le molecole di APP sulle cellule adiacenti promuovono la sinaptogenesi.
  Riferimenti correlati: PMID:25122912
• L'APP serve da recettore di membrana della chinesina I, mediando il trasporto assonale della beta-secretasi e della presenilina 1, il che è cruciale per la consegna del carico verso le sinapsi.
  Riferimenti correlati: PMID:17062754, PMID:23011729
• I peptidi beta-amiloide, derivati dalla proteolisi dell'APP, sono chelatori metallici lipofili che legano rame, zinco e ferro, e possono ridurre Cu²⁺ e Fe³⁺; promuovono l'aggregazione della tau e la fosforilazione mediata da TPK II, e la loro interazione con HADH2 sovraspresso contribuisce allo stress ossidativo.
• I peptidi Gamma-CTF e i frammenti scissi dalla caspasi, come C31, sono potenti potenziatori dell'apoptosi neuronale.
• L'APP contiene un dominio inibitore della serina proteasi di tipo Kunitz (BPTI) in alcune isoforme, conferendo attività inibitoria della proteasi, e subisce estese modifiche post-traduzionali tra cui N- e O-glicosilazione, fosforilazione e solfatazione.
• A livello subcellulare, l'APP è localizzata sulla membrana cellulare, nelle fosse rivestite di clatrina, nei endosomi precoci, nel reticolo endoplasmatico, nell'apparato di Golgi, nelle vescicole citoplasmatiche ed è anche secreta; può essere rilevata nel nucleo e nel citoplasma.
• L'APP è espressa nel cervello e nel liquido cerebrospinale, con i livelli più alti nel lobo frontale della corteccia; si trova anche nel rene, nel cuore, nella milza e nel plasma. L'isoforma APP695 predomina nei neuroni, mentre APP751 e APP770 sono espresse in cellule non neuronali (PubMed:2649245).
  Riferimenti correlati: PMID:2649245

Guida sperimentale e suggerimenti tecnici

• A causa della progettazione dell'immunogeno (amminoacidi 1-100 della Aβ42 umana), ci si aspetta che l'anticorpo riconosca sia l'APP a lunghezza intera (~87 kDa) sia i frammenti proteolitici contenenti beta-amiloide, come CTF99, CTF83 e peptidi Aβ, nel Western blot. La convalida in campioni di tipo selvaggio rispetto a campioni APP knockout può aiutare a confermare la specificità, dato lo stato validato KO.
• Per l'ELISA, considerare l'abbinamento di questo anticorpo policlonale con un anticorpo monoclonale che riconosce un epitopo APP diverso per sviluppare un saggio sandwich sensibile. Si raccomanda l'ottimizzazione delle condizioni di rivestimento e rilevamento.
• Sebbene l'anticorpo sia prodotto contro APP umana e mostri reattività crociata con campioni umani, gli utenti che lavorano con altre specie dovrebbero condurre un'adeguata convalida a causa della potenziale divergenza della sequenza.
• L'anticorpo viene spedito in borse del ghiaccio per mantenere la stabilità; alla ricezione, aliquotare e conservare a -20°C o -80°C per evitare cicli ripetuti di congelamento-scongelamento.

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