Anticorpo policlonale anti-APTX di coniglio per WB, IF/ICC, IP, ELISA - Q7Z2E3

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di APTX

• L'apratassina (APTX), nota anche come proteina simile al triade istidinico a dominio associato alla forcina (FHA-HIT), è una proteina legante il DNA coinvolta nella riparazione di rotture del filamento singolo, rotture del filamento doppio e riparazione di basi excisionate (PubMed:15044383, PubMed:15380105, PubMed:16964241). Risolve gli intermedi abortivi di legazione del DNA catalizzando il rilascio di gruppi adenilati dalle estremità 5'-fosfato, generando estremità 5'-fosfato che possono essere rilegate efficacemente (PubMed:16964241, PubMed:17276982, PubMed:24362567). Riferimenti correlati: PMID:15044383, PMID:15380105, PMID:16964241, PMID:17276982, PMID:24362567

• APTX idrolizza anche adenosina 5'-monofosforamidato (AMP-NH(2)) e diadenosina tetrafosfato (AppppA), sebbene con una attività catalitica inferiore (PubMed:16547001). Mostra una attività specifica maggiore con adenosina legata a 5' (AppDNA) rispetto agli addotti del DNA con guanosina o inosina legati a 3' (per similarità). Riferimenti correlati: PMID:16547001

• La proteina si localizza prevalentemente nel nucleo, incluso il nucleoplasma e il nucleolo, ma è rilevabile anche nel citoplasma.

• APTX contiene un dito di zinco e un dominio FHA e richiede il legame con ioni metallici per la sua attività. È soggetta a fosforilazione (parola chiave fosfoproteina).

• L'isoforma 1 è espressa in modo elevato nella corteccia cerebrale e nel cervelletto rispetto all'isoforma 2. APTX è ampiamente espressa in tessuti come fegato, rene, linfonodi, muscolo scheletrico, fibroblasti, linfociti e pancreas (PubMed:14755728, PubMed:11586299, PubMed:11586300, PubMed:15276230). Riferimenti correlati: PMID:14755728, PMID:11586299, PMID:11586300, PMID:15276230

• Le mutazioni in APTX causano atassia con oculomotore aprassia di tipo 1 (AOA1), una malattia neurodegenerativa, che evidenzia il suo ruolo essenziale nella riparazione del DNA neuronale.

Indicazioni sperimentali e consigli tecnici

• L'immunogeno (proteina ricombinante che comprende gli amminoacidi 93-342 di APTX umana) copre il dominio catalitico HIT; pertanto, l'anticorpo policlonale generato può riconoscere entrambe le isoforme. Verificare la rilevazione dell'isoforma nel proprio sistema di campionamento.
• Per Western blot (WB), il peso molecolare previsto è 41 kDa, ma le modifiche post-traduzionali possono causare lievi spostamenti. Utilizzare controlli positivi appropriati (ad esempio lisati di HeLa, HEK293) e convalidare con silenziamento siRNA se possibile.
• Per immunofluorescenza (IF/ICC), aspettarsi una colorazione nucleare con possibile arricchimento nucleolare. Utilizzare una colorazione di controllo con un marcatore nucleolare (ad esempio fibrillarina) per confermare la localizzazione.
• Per immunoprecipitazione (IP), l'anticorpo può catturare APTX e le sue proteine interagenti coinvolte nella riparazione del DNA. Ottimizzare le condizioni del buffer di lisit (ad esempio concentrazione di sale, detergente) per preservare i complessi proteici.
• Le applicazioni ELISA possono essere sviluppate utilizzando la proteina o il peptide ricombinante di APTX come standard. Titolare l'anticorpo per ottenere un rapporto segnale/rumore ottimale.
• Questo anticorpo è validato per la reattività con l'uomo; la reattività incrociata con altre specie non è stata determinata. Se si utilizzano campioni non umani, si consiglia l'allineamento della sequenza della regione dell'immunogeno.

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