Anticorpo monoclonale anti-ARF5 per WB, IF/ICC, ELISA - P84085

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: funzione e localizzazione di ARF5

• Il fattore 5 di ADP-ribosilazione (ARF5) è una piccola proteina legante il GTP che alterna stati attivi legati al GTP e stati inattivi legati al GDP, fungendo da interruttore molecolare nel traffico intracellulare.
• ARF5 svolge un ruolo chiave nel traffico delle proteine, contribuendo alla gemmazione e alla rimozione del rivestimento delle vescicole presso l'apparato del Golgi.
• Regola l'attività di mTORC1 promuovendo il reclutamento del complesso mTORC1 sulle increspature della membrana plasmatica e facilitandone l'attivazione attraverso la via di segnalazione PI3K/Akt. Riferimenti correlati: PMID:36735494
• ARF5 agisce come risposta precoce al danno lisosomiale e partecipa alle vie di controllo della qualità dei lisosomi. Riferimenti correlati: PMID:41293316
• Nell'infezione microbica, ARF5 funge da attivatore allosterico della subunità catalitica della tossina colerica, un'ADP-ribosiltransferasi.
• ARF5 è localizzato in molteplici compartimenti cellulari, tra cui l'apparato del Golgi (membrana della rete trans-Golgi), la membrana cellulare, il citoplasma (regione perinucleare) e la membrana lisosomiale, riflettendo il suo ruolo dinamico nel traffico intracellulare.
• È una lipoproteina miristoilata, con un gruppo miristoile legato alla sua estremità N-terminale, che probabilmente facilita l'associazione alla membrana.
• La proteina ha un peso molecolare calcolato di circa 20,5 kDa e appartiene alla famiglia ARF delle piccole GTPasi.

Linee guida sperimentali e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno corrisponde agli amminoacidi 81–180 di ARF5 umano, una regione conservata nell'uomo, nel topo e nel ratto; pertanto, l'anticorpo può rilevare ARF5 in queste specie, ma la reattività crociata deve essere convalidata nel sistema sperimentale pertinente.
• Per il Western blot (WB), ARF5 è previsto a ~21 kDa; si consiglia di utilizzare controlli positivi appropriati (ad es. lisati cellulari di HeLa e HEK293) e di confermare la specificità della banda mediante validazione con siRNA o knockout.
• Nell'immunofluorescenza (IF/ICC), ARF5 si localizza nel Golgi e nelle vescicole citoplasmatiche; le condizioni di fissazione e permeabilizzazione devono essere ottimizzate per i marcatori del Golgi e si raccomanda la co-colorazione con marcatori degli organelli.
• Per l'ELISA, l'anticorpo può essere utilizzato come reagente di rilevazione o di cattura; per i saggi ELISA sandwich potrebbe essere necessario abbinarlo a una coppia di anticorpi anti-ARF5 idonea.
• Poiché ARF5 è una proteina miristoilata associata alla membrana, i tamponi di estrazione contenenti detergenti delicati possono migliorarne la solubilità senza compromettere il riconoscimento dell'epitopo.

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