Anticorpo policlonale coniglio anti-ARF5 per WB, ELISA - P84085

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione dell'ARF5

• ARF5 è un membro della famiglia dei fattori di ADP-ribosilazione (ARF) di piccole GTPasi, che svolgono ruoli essenziali nel traffico vescicolare intracellulare e nella struttura degli organelli.
• Funziona come proteina legante il GTP che contribuisce alla gemmazione e allo svestimento delle vescicole nell'apparato di Golgi, mediando il trasporto proteico tra il reticolo endoplasmatico e il Golgi.
• ARF5 regola l'attività di mTORC1 promuovendo il reclutamento di mTORC1 ai ripples della membrana plasmatica, facilitando così la sua attivazione tramite la via di segnalazione PI3K/Akt. Riferimenti correlati: PMID:36735494
• Agisce come rispondente precoce al danno lisosomiale e partecipa alle vie di controllo di qualità dei lisosomi, evidenziando il suo ruolo nel mantenere l'omeostasi cellulare. Riferimenti correlati: PMID:41293316
• Durante l'infezione microbica, ARF5 funge da attivatore allosterico della subunità catalitica della tossina colerica, una ADP-ribosiltransferasi, indicando il suo coinvolgimento nelle interazioni ospite-patogeno.
• La proteina localizza in più compartimenti cellulari, inclusi la membrana cellulare, l'apparato di Golgi, la membrana della rete trans-Golgi, il citoplasma (regione perinucleare) e la membrana lisosomiale.
• ARF5 è caratterizzato da modificazioni post-traduzionali come la N-miristoilazione, che lo ancora alle membrane, e contiene domini di legame del GTP conservati essenziali per le sue funzioni regolatorie.

Guida sperimentale e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno corrisponde alla regione N-terminale (amminoacidi 1-180) dell'ARF5 umano. Questa regione include il dominio di legame del GTP conservato ed è probabile che rilevi l'ARF5 a lunghezza intera. Considerare l'utilizzo di un lisato di controllo positivo da HeLa, HEK293 o altre linee cellulari umane che esprimono ARF5 per la validazione tramite Western blot.
• Per il Western blot, il peso molecolare previsto dell'ARF5 è di circa 21 kDa. Utilizzare condizioni SDS-PAGE riducenti e un tampone di blocco standard. Ottimizzare empiricamente la diluizione dell'anticorpo primario tra 1:500 e 1:2000 e includere un anticorpo secondario appropriato per la specie.
• L'anticorpo è adatto per applicazioni ELISA. Per ELISA diretto o a sandwich, titolare l'anticorpo contro la proteina ricombinante utilizzata come immunogeno o contro lisati cellulari per determinare le concentrazioni ottimali di rivestimento e rilevamento.
• La reattività crociata è riportata con ARF5 umano, murino e di ratto. Quando si lavora con campioni di topo o ratto, validare l'anticorpo nel proprio specifico modello sperimentale, poiché le modificazioni post-traduzionali o i livelli di espressione proteica possono variare.

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