Anticorpo policlonale coniglio anti-Dimetil-Asimmetrica Istona H3-R17 (Q16695/P68431) per WB, IF/ICC, ELISA

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione della Dimetil-Asimmetrica Istona H3-R17

• L'istona H3 è un componente principale del nucleosoma, avvolgendo il DNA nella cromatina e svolgendo un ruolo centrale nella regolazione della trascrizione, nella riparazione del DNA, nella replicazione del DNA e nella stabilità cromosomica. Le modificazioni post-traduzionali (PTM) delle istoni, collettivamente note come codice delle istoni, governano l'accessibilità e la funzione della cromatina.
• La dimetilazione asimmetrica dell'istona H3 all'arginina 17 (H3R17me2a; corrispondente alla posizione 18 nella sequenza canonica UniProt) è catalizzata dalla metiltransferasi arginina proteica CARM1 (coactivator-associated arginine methyltransferase 1). Questa modifica è associata all'attivazione trascrizionale e al reclutamento di complessi co-attivatori.
• Sia l'istona canonica H3.1 (codificata da più geni come H3C1, H3C2, ecc.; UniProt P68431) che la variante specifica dei testicoli H3.1t (H3-4; UniProt Q16695) portano questa modifica. H3.1t è espressa nelle cellule testicolari, mentre H3.1 è espressa ubiquitariamente nelle cellule somatiche.
• L'istona H3 si localizza nel nucleo ed è trovata prevalentemente nei nucleosomi lungo i cromosomi. La coda N-terminale, dove si trova R17, sporge dal nucleosoma centrale ed è un hotspot per numerose PTM che regolano l'espressione genica.
• L'immunogeno peptide sintetico corrisponde ai primi 100 amminoacidi dell'istona H3 umana, una regione altamente conservata tra gli eucarioti, il che spiega la prevista ampia cross-reattività di questo anticorpo. Riferimenti correlati:
• PMID:15345777
• PMID:15471871
• PMID:16497732
• UniProt Q16695
• UniProt P68431

Guida sperimentale e suggerimenti tecnici

• Per il Western blotting (WB), si raccomandano istone estratte con acido o lisati cellulari totali da linee cellulari pertinenti. Il peso molecolare previsto dell'istona H3 è di circa 15 kDa. Considerare l'uso di saggi di competizione peptidica o campioni CARM1-knockout per confermare la specificità di rilevamento per la modifica dimetil-R17 asimmetrica.
• Nell'immunofluorescenza/immunocitochimica (IF/ICC), le condizioni di fissaggio e permeabilizzazione influenzano significativamente l'accessibilità dell'epitopo. La fissazione con metanolo spesso migliora il segnale nucleare; ottimizzare la diluizione dell'anticorpo e i passaggi di blocco per minimizzare il background.
• Per l'ELISA, l'anticorpo può essere utilizzato con peptidi sintetici per distinguere la dimetil-R17 asimmetrica dai peptidi H3 dimetilici simmetrici o non modificati. Includere controlli appropriati per garantire la specificità.
• A causa della prevista ampia cross-reattività, validare l'anticorpo nella vostra specifica specie e modello tissutale prima di applicarlo a esperimenti critici.
• Questo anticorpo è un membro della categoria Anticorpi metilati ed è adatto per la ricerca epigenetica. Sebbene non validato qui per l'immunoprecipitazione della cromatina (ChIP) o per l'analisi multiplex, può essere integrato con altri reagenti specifici per le modificazioni delle istoni per tali applicazioni con appropriata ottimizzazione.

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