Anticorpo Policlonale Anti-ATG12 per WB, IF/ICC, ELISA - O94817

Specifiche e Parametri Principali del Prodotto

Contesto Biologico: Funzione e Localizzazione di ATG12

• ATG12 (proteina simile all'ubiquitina, nota anche come APG12-like) è un componente chiave della via autofagica, essenziale per la formazione dell'autofagosoma.
• ATG12 si coniuga con ATG5 attraverso un sistema simile all'ubiquitina che coinvolge ATG7 (simile a E1) e ATG10 (simile a E2). Il coniugato ATG12-ATG5 agisce quindi come un enzima simile a E3, promuovendo la lipidazione delle proteine della famiglia ATG8 e la loro associazione alla membrana.
• Il complesso ATG12-ATG5, insieme ad ATG16L1, è necessario per il reclutamento di LRRK2 ai lisosomi stressati e per l'induzione dell'attività chinasica di LRRK2 in risposta allo stress lisosomiale (Per similarità).
• A livello subcellulare, ATG12 si localizza nel citoplasma e nella membrana della struttura preautofagosomiale, in linea con il suo ruolo nelle fasi precoci dell'autofagia.
• ATG12 è espresso in modo ubiquitario nei tessuti umani, riflettendo il suo ruolo fondamentale nell'omeostasi cellulare.
• Le modificazioni post-traduzionali includono l'acetilazione e la formazione di un legame isopeptidico con ATG5. Lo splicing alternativo produce più isoforme ed è stata risolta una struttura 3D (Identificazione proteomica; Proteoma di riferimento; Via di coniugazione Ubl).
• Nelle infezioni virali, ATG12 agisce come fattore provirale: il coniugato ATG5-ATG12 regola negativamente la risposta immunitaria antivirale innata compromettendo la produzione di IFN di tipo I in seguito a infezione da VSV; è inoltre necessario per la traduzione dell'RNA dell'HCV in ingresso e l'inizio della replicazione, sebbene non per l'infezione stabilita. Riferimenti correlati: PMID:17709747 PMID:19666601

Guida Sperimentale e Consigli Tecnici

• L'immunogeno è un peptide sintetico della regione N-terminale (aa 1–100) di ATG12 umano. Valutare l'accessibilità dell'epitopo nel tipo di campione utilizzato; per il WB potrebbe non essere necessario il recupero dell'antigene standard.
• Nel Western blot, attendersi una banda a ~15 kDa per ATG12 monomerico. Il coniugato ATG12-ATG5 può apparire a peso molecolare più elevato in condizioni non riducenti; includere controlli appropriati per distinguere le forme.
• Per l'immunofluorescenza/ICC, il pattern di colorazione atteso è citoplasmatico e punteggiato (strutture preautofagosomiali). Una colorazione doppia con marcatori dell'autofagia (es. LC3) può aiutare a confermare la specificità.
• Questo anticorpo policlonale reagisce in modo incrociato con ATG12 di topo e ratto, rendendolo adatto per studi interspecie. Validare sempre nel background di specie rilevante.
• Come per tutti gli anticorpi policlonali, è possibile una variabilità da lotto a lotto. Includere controlli positivi e negativi in ogni esperimento e considerare una titolazione per un rapporto segnale/rumore ottimale.

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