Anticorpo policlonale rabbit Anti-ATG4A per WB, IF/ICC, ELISA - Q8WYN0

Specifiche e parametri principali del prodotto

Background biologico: Funzione e localizzazione di ATG4A

• ATG4A è una cisteina proteasi essenziale per l'autofagia, che media sia l'attivazione proteolitica che la delipidazione delle proteine della famiglia ATG8. Riferimenti correlati: PMID:12473658, PMID:15169837, PMID:17347651

• L'attività proteasica di ATG4A cliva il residuo C-terminale delle proteine ATG8 (tra cui MAP1LC3A, GABARAP, GABARAPL2) per esporre una glicina, necessaria per la loro coniugazione con il PE e il targeting verso le membrane durante l'autofagia. Riferimenti correlati: PMID:12473658, PMID:15169837, PMID:17347651

• ATG4A catalizza la delipidazione delle proteine della famiglia ATG8 coniugate al PE, con una attività di delipidazione maggiore rispetto a ATG4B, contribuendo quindi al riciclo delle proteine ATG8. Riferimenti correlati: PMID:29458288, PMID:33909989

• Funziona come enzima simile a una deubiquitinasi per contrastare l'ATG8ilazione, clivando ATG8 da coniugati come ATG3. Riferimenti correlati: PMID:31315929, PMID:33773106

• Indipendentemente dalla sua attività proteasica, ATG4A regola la mitofagia controllando il traffico di ATG9A verso i mitocondri e facilitando i contatti tra fagoforo e reticolo endoplasmatico durante il trasferimento dei lipidi. Riferimenti correlati: PMID:33773106

• ATG4A localizza nel citoplasma, coerentemente con il suo ruolo nell'autofagia.

• Il gene ATG4A subisce splicing alternativo, producendo più isoforme, ed è stato identificato in studi di proteomica.

Guida sperimentale e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno comprende gli amminoacidi 210–398 di ATG4A umana, una regione che può includere domini funzionalmente rilevanti; nell'interpretazione dei dati di reattività incrociata è necessario tenere conto della conservazione dell'epitopo e dell'omologia tra specie.
• Per il Western blotting in condizioni riducenti è attesa una banda vicino ai 45 kDa; utilizzare come controllo positivo lisati cellulari o tissutali appropriati con espressione confermata di ATG4A.
• Nell'immunofluorescenza o nell'immunocitochimica dovrebbe essere rilevabile la localizzazione citoplasmatica di ATG4A; ottimizzare i protocolli di fissazione e permeabilizzazione per il tipo cellulare specifico.
• Le applicazioni ELISA possono essere sviluppate utilizzando proteina ATG4A ricombinante o frammenti peptidici; le condizioni di analisi potrebbero richiedere un'ottimizzazione empirica.
• È dichiarata la reattività incrociata con gli ortologhi di topo e ratto; convalidare la specificità nella specie bersaglio utilizzando modelli di knockout o knockdown quando possibile.

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