Anticorpo policlonale di coniglio anti-ATG4D per WB, IF/ICC, ELISA - Q86TL0

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: funzione e localizzazione di ATG4D

• ATG4D è una proteasi a cisteina che svolge un ruolo chiave nell'autofagia mediando sia l'attivazione proteolitica sia la delipidazione delle proteine della famiglia ATG8. Scinde l'amminoacido C-terminale di MAP1LC3 e GABARAPL2, esponendo un residuo di glicina essenziale per la coniugazione alla fosfatidiletanolammina (PE) e l'inserimento nella membrana. Riferimenti correlati: PMID:21177865
• Oltre all'attivazione proteolitica, ATG4D catalizza la delipidazione delle proteine ATG8 coniugate alla PE durante la macroautofagia e delle proteine ATG8 coniugate alla fosfatidilserina (PS) nell'autofagia non canonica, agendo come principale enzima di delipidazione tra i membri della famiglia ATG4. Riferimenti correlati: PMID:29458288, PMID:33909989
• ATG4D è coinvolta nella crescita del fagoforo durante la mitofagia indipendentemente dalla sua attività proteasica, regolando il traffico di ATG9A verso i mitocondri e promuovendo i contatti tra fagoforo e reticolo endoplasmatico durante il trasferimento lipidico. Riferimenti correlati: PMID:33773106
• La proteina agisce come regolatore dell'autofagia collegando la disfunzione mitocondriale all'apoptosi; il suo importo nei mitocondri durante lo stress cellulare e la differenziazione influenza la fisiologia mitocondriale, i livelli di ROS, la mitofagia e la vitalità cellulare.
• A livello subcellulare, ATG4D è localizzata nel citoplasma e nella matrice mitocondriale, in linea con il suo duplice ruolo nell'autofagia e nella regolazione mitocondriale.
• È ampiamente espressa, con un'espressione rilevante nei testicoli, e subisce splicing alternativo. Le modifiche post-traduzionali includono la fosforilazione.

Indicazioni sperimentali e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno corrisponde alla regione N-terminale (amminoacidi 1-230) di ATG4D umano. Quando si analizzano i campioni, considerare che questa regione può essere conservata tra diverse isoforme o specie e validare di conseguenza i profili delle bande.
• Per il western blot (WB), il peso molecolare previsto è di circa 53 kDa, ma ATG4D endogena può essere sottoposta a processamento proteolitico o modificazione; validare le dimensioni delle bande utilizzando controlli positivi appropriati e lisati di cellule umane o murine.
• Nell'immunofluorescenza/immunocitochimica (IF/ICC), valutare i pattern di colorazione citoplasmatica e mitocondriale. Potrebbe essere necessario ottimizzare le condizioni di fissazione e permeabilizzazione per rilevare ATG4D localizzata nei mitocondri.
• Per le applicazioni ELISA, l'anticorpo può essere utilizzato per la rilevazione di ATG4D ricombinante o endogena; stabilire curve standard con concentrazioni note dell'antigene e considerare la reattività crociata con membri correlati della famiglia ATG4 in caso di analisi multiplex.

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