Anticorpo Monoclonale Anti-ATG5 per WB, IF-P, IHC-P, IP, ELISA - Q9H1Y0

Specifiche e Parametri Principali del Prodotto

Contesto Biologico: Funzione e Localizzazione dell'ATG5

• La proteina autofagica 5 (ATG5), nota anche come APG5-like, ASP o hAPG5, è una proteina chiave correlata all'autofagia codificata dal gene ATG5 (Gene ID: 9474) nell'uomo.
• ATG5 è essenziale per la formazione delle vescicole autofagiche. Si coniuga con ATG12 attraverso un sistema simile all'ubiquitina che coinvolge ATG7 (tipo E1) e ATG10 (tipo E2). Il coniugato ATG12-ATG5 agisce come un enzima tipo E3 per la lipidazione delle proteine della famiglia ATG8, facilitando la loro associazione con le membrane vescicolari.
• ATG5 svolge un ruolo critico nel controllo della qualità mitocondriale dopo il danno ossidativo, contribuendo alla longevità cellulare, ed è coinvolto nello sviluppo dei linfociti, dove è essenziale per la sopravvivenza e la proliferazione delle cellule B e T.
• La proteina è necessaria per un'elaborazione e presentazione ottimale degli antigeni tramite MHC II, il mantenimento della morfologia dell'assone, la normale differenziazione degli adipociti e promuove la ciliogenesi primaria rimuovendo OFD1 dai satelliti centriolari e degradando IFT20 tramite autofagia.
• ATG5 può anche funzionare nell'apoptosi, possibilmente all'interno del citoscheletro modificato. La sua espressione è upregolata nelle cellule apoptotiche a valle dell'attività delle caspasi ed è cruciale per la morte cellulare autofagica indotta da IFN-gamma interagendo con FADD.
• (Infezione microbica) ATG5 può agire come un fattore provirale: regola negativamente la risposta immunitaria antivirale innata compromettendo la produzione di IFN di tipo I durante l'infezione da VSV ed è richiesta per l'avvio della traduzione e replicazione dell'RNA del virus dell'epatite C. Riferimenti correlati: PMID:17709747 PMID:19666601
• A livello subcellulare, ATG5 si localizza nel citoplasma e nella membrana della struttura preautofagosomiale. È espressa in modo ubiquitario a livello di mRNA, ma la proteina è espressa in modo drammaticamente elevato nelle cellule apoptotiche.
• Le principali modifiche post-traduzionali includono l'acetilazione e la formazione di un legame isopeptidico con ATG12. La proteina è associata a parole chiave come autofagia, apoptosi, interazione ospite-virus, immunità e neurodegenerazione.

Guida Sperimentale e Consigli Tecnici

• L'immunogeno è un peptide sintetico all'interno degli amminoacidi 1-100 dell'ATG5 umano. Validare la specificità utilizzando linee cellulari ATG5 knockout o knockdown con siRNA.
• Per il rilevamento Western blot (WB), è prevista una banda intorno a 32-35 kDa (monomero ATG5; il coniugato ATG12-ATG5 migra più in alto a ~55 kDa). Considerare il test in campioni con autofagia indotta (es. a digiuno o trattati con rapamicina) per potenziare il segnale.
• In immunofluorescenza (IF) e immunochimica (IHC), ATG5 mostra una colorazione citoplasmatica puntiforme che si accumula upon induzione dell'autofagia; ottimizzare la fissazione e la permeabilizzazione per preservare le strutture degli autofagosomi.
• Per l'immunoprecipitazione (IP), l'anticorpo può catturare sia ATG5 libero che il coniugato ATG12-ATG5; assicurarsi di utilizzare condizioni di lisi appropriate per rilevare le interazioni proteina-proteina.
• È prevista la reattività incrociata con topo e ratto in base all'omologia di sequenza; tuttavia, verificare le prestazioni nella specie e nel contesto tissutale pertinenti.

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