Anticorpo policlonale coniglio anti-ATM per WB, ELISA - Q13315

Specifiche principali del prodotto e parametri

Contesto biologico: Funzione e localizzazione dell'ATM

• Proteina chinasi serina/treonina che attiva la segnalazione dei checkpoint in risposta a rotture a doppia elica del DNA (DSBs), apoptosi e stress genotossici, agendo come un sensore critico dei danni al DNA. Riferimenti correlati: PMID:10550055, PMID:10839545, PMID:10910365

• Riconosce la sequenza di consenso del substrato [ST]-Q e fosforila proteine chiave della risposta al danno del DNA tra cui CHEK2, p53/TP53, BRCA1 e nibrina (NBN). Riferimenti correlati: PMID:10550055, PMID:10839545, PMID:10910365, PMID:10766245, PMID:10802669

• Fosforila la variante dell'istone H2AX alla Ser-139 nelle rotture a doppia elica, regolando così il meccanismo di risposta al danno del DNA (Per somiglianza).

• Fosforila diversi substrati tra cui DYRK2, ATF2, ERCC6, TTC5/STRAP e PEX5 per coordinare la riparazione del DNA, l'apoptosi e l'omeostasi cellulare. Riferimenti correlati: PMID:19965871, PMID:15916964, PMID:29203878, PMID:15448695, PMID:26344566

• Trovato nel nucleo, vescicole citoplasmatiche, centrosomi e matrice dei perossisomi, coerente con i suoi ruoli nella segnalazione del danno al DNA, nel trasporto e nella pessofagia.

• Espresso ubiquitariamente, con i livelli più alti nel pancreas, rene, muscolo scheletrico, fegato, polmone, placenta, cervello, cuore, milza, timo, testicolo, ovaio, intestino tenue, colon e leucociti.

Guida sperimentale e suggerimenti tecnici

• Per l'analisi western blot, prevedere una banda intorno a 351 kDa. A causa delle grandi dimensioni della proteina, considerare l'uso di gel a graduale a bassa percentuale, tempi di trasferimento a umido prolungati e verificare l'efficienza del trasferimento con un marcatore pre-colorato ad alto peso molecolare.
• L'immunogeno è un peptide sintetico della regione C-terminale (aa 1900–2000). L'accessibilità dell'epitopo può essere influenzata dalla conformazione della proteina; si raccomandano condizioni denaturanti e riducenti.
• Essendo un anticorpo policlonale, può presentare variabilità da lotto a lotto. Validare ogni nuovo lotto su un controllo positivo noto (ad es. lisato cellulare umano che esprime ATM) prima dell'uso.
• Per l'ELISA, ottimizzare la concentrazione dell'antigene di rivestimento e le condizioni di rilevamento. Si prevede che l'anticorpo riconosca l'ATM umano; la reattività incrociata con altre specie non è stata testata.
• Per confermare la specificità, considerare l'uso di campioni con ATM depleto (ad es. knockdown con siRNA) o un peptide competitivo nel sistema di saggio.

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