Anticorpo policlonale anti-ATP5F1 per WB, IF/ICC, ELISA - P24539

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione dell'ATP5F1

• ATP5F1 codifica la subunità b del peduncolo periferico dell'ATP sintasi mitocondriale F1F0 (Complesso V), un enzima chiave nella fosforilazione ossidativa che sintetizza l'ATP utilizzando il gradiente di protoni attraverso la membrana interna mitocondriale. Riferimenti correlati: PMID:37244256
• Nota anche come subunità B1 del complesso F(0) dell'ATP sintasi o PIG47, questa proteina è un componente essenziale del peduncolo periferico stazionario, che agisce come statore per mantenere statici il subcomplesso catalitico α3β3 e la subunità a/ATP6 rispetto agli elementi rotanti durante la catalisi.
• Il complesso dell'ATP sintasi è costituito da un dominio testa F1 solubile (nucleo catalitico) e un dominio F0 incorporato nella membrana (canale del protone), collegati da un peduncolo rotante centrale e dal peduncolo periferico che include ATP5F1.
• Studi di localizzazione subcellulare e dati di proteomica confermano che ATP5F1 risiede nella membrana interna del mitocondrio, coerente con il suo ruolo nella transduzione di energia.
• Modificazioni post-traduzionali come l'acetilazione sono state identificate su ATP5F1, il che potrebbe regolare l'assemblaggio o l'attività del complesso dell'ATP sintasi.
• La proteina è classificata sotto parole chiave tra cui CF(0), trasporto di ioni idrogeno, trasporto ionico e membrana interna mitocondriale, evidenziando il suo coinvolgimento diretto nella translocazione di protoni e nella sintesi di ATP.

Guida sperimentale e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno utilizzato (residui 1–245) copre una grande porzione della proteina matura, che potrebbe produrre anticorpi che riconoscono sia l'ATP5F1 nativo che quello denaturato; considerare la validazione del rilevamento in frazioni arricchite di mitocondri o lisati cellulari totali.
• Per le applicazioni WB, è prevista una banda vicino a 29 kDa; ottimizzare la diluzione dell'anticorpo primario e i tempi di esposizione per ottenere un segnale chiaro con basso rumore di fondo.
• Negli esperimenti IF/ICC, verificare la localizzazione mitocondriale mediante colorazione simultanea con un marcatore mitocondriale (es. MitoTracker o un anticorpo noto per una proteina mitocondriale) per confermare la specificità.
• Essendo un anticorpo policlonale, può verificarsi variabilità da lotto a lotto; si consiglia di testare pilota ogni nuovo lotto nel sistema di saggio prima di esperimenti su larga scala.
• Per le applicazioni ELISA, utilizzare condizioni di rivestimento appropriate e includere un controllo positivo (es. proteina ATP5F1 ricombinante) per convalidare le prestazioni della piastra.

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