Anticorpo Policlonale Anti-ATP6V1E1 per WB, IF/ICC, ELISA - P36543

Specifiche e Parametri Principali del Prodotto

Contesto Biologico: Funzione e Localizzazione di ATP6V1E1

• ATP6V1E1 codifica per la subunità E 1 della proton ATPasi di tipo V, nota anche come subunità V-ATPasi 31 kDa (p31), subunità E 1 della pompa protonica vacuolare e ATP6E/ATP6E2. Lo splicing alternativo può generare più isoforme.
• Come subunità del complesso periferico V1 della V-ATPasi, partecipa all'idrolisi dell'ATP per guidare la traslocazione di protoni attraverso le membrane, acidificando così compartimenti intracellulari come lisosomi, endosomi e vescicole secretorie (PubMed:32001091, PubMed:33065002). Riferimenti correlati: PMID:32001091 PMID:33065002
• La V-ATPasi si localizza anche sulla membrana plasmatica in alcuni tipi cellulari, contribuendo all'acidificazione extracellulare e alla regolazione del pH (PubMed:32001091). Riferimenti correlati: PMID:32001091
• Il complesso V-ATPasi agisce come attivatore di mTORC1 sulle membrane lisosomiali facilitando l'attività di scambio di nucleotidi di guanina (GEF) del complesso Ragulator, promuovendo così il reclutamento di mTORC1 e la segnalazione anabolica (PubMed:22053050, PubMed:39695235). Riferimenti correlati: PMID:22053050 PMID:39695235
• A livello subcellulare, ATP6V1E1 si trova sulla membrana cellulare apicale, sulle membrane delle vescicole citoplasmatiche (vescicole sinaptiche, vescicole rivestite di clatrina) e sulla membrana lisosomiale.
• La proteina è espressa in modo ubiquitario, con alti livelli nel rene (in particolare nel nefrone distale), nella pelle, ed è ampiamente rilevata in vari tessuti (PubMed:29993276, PubMed:12036578, PubMed:28065471). Riferimenti correlati: PMID:29993276 PMID:12036578 PMID:28065471
• Le modificazioni post-traduzionali includono acetilazione e fosforilazione, come indicato da studi di proteomica, che possono regolarne l'assemblaggio o l'attività.

Linee Guida Sperimentali e Consigli Tecnici

• L'immunogeno corrisponde agli amminoacidi 77-226 di ATP6V1E1 umano, una regione ben conservata tra le specie, il che supporta l'osservata reattività crociata con topo e ratto.
• Per il Western blot, è attesa una banda di circa 26kDa. Utilizzare controlli positivi appropriati come lisati di tessuto di HeLa o rene e considerare l'inclusione di un controllo negativo.
• Nell'immunofluorescenza/ICC, l'anticorpo dovrebbe riconoscere la V-ATPasi in strutture vescicolari e possibilmente sulla membrana plasmatica. Si raccomanda l'ottimizzazione delle condizioni di permeabilizzazione e fissaggio per ogni tipo cellulare.
• Le applicazioni ELISA possono utilizzare l'immunogeno ricombinante o frammenti peptidici come antigeni di rivestimento; si consiglia una pre-validazione dell'anticorpo nel formato di saggio scelto.
• Essendo un anticorpo policlonale, può rilevare più isoforme derivanti dallo splicing alternativo; questa proprietà può essere vantaggiosa per rilevare i livelli totali di ATP6V1E1.
• Sebbene la reattività crociata con topo e ratto sia indicata dal fornitore, si raccomanda una validazione individuale nel vostro specifico sistema campione a causa di potenziali variazioni specifiche della specie nell'accessibilità dell'antigene.

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