Anti-ATP7B Coniglio Anticorpo Policlonale per WB, IHC-P, ELISA - P35670

Specifiche e Parametri Principali del Prodotto

Contesto Biologico: Funzione e Localizzazione dell'ATP7B

• Identità della proteina: ATP7B, nota anche come ATPasi 2 di trasporto del rame o proteina associata alla malattia di Wilson, è un'ATPasi di tipo P di trasporto del rame codificata dal gene ATP7B (GeneID 540). Appartiene alla sottfamiglia P1B delle ATPasi di trasporto di metalli pesanti.
• Funzione principale: ATP7B media l'esportazione dipendente da ATP del rame dalle cellule, fondamentale per mantenere l'omeostasi del rame. Negli epatociti, facilita l'efflusso del rame nella bile, specialmente in condizioni di elevati livelli intracellulari di rame, prevenendo così l'accumulazioni tossica.
• Localizzazione subcellulare: In condizioni basali di rame, ATP7B risiede principalmente nella membrana della rete del Golgi trans (TGN), dove fornisce rame alle cuproenzimi. In caso di sovraccarico di rame, si transloca alle vescicole citoplasmatiche e alla membrana plasmatica, così come agli endosomi tardivi e ai mitocondri, per esportare il rame in eccesso.
• Espressione tissutale: ATP7B è più abbondante nel fegato e nel rene, con una minore espressione nel cervello. Sono rilevati anche una isoforma specifica del cervello (isoforma 2) e una forma clivata proteoliticamente di 140 kDa (WND/140 kDa).
• Modifiche post-traduzionali e regolazione: La proteina subisce fosforilazione e splicing alternativo, e un evento di frameshift ribosomiale può generare varianti aggiuntive. Queste modifiche influenzano il suo traffico e l'attività catalitica.
• Rilevanza clinica: Le mutazioni in ATP7B causano la malattia di Wilson (WD), un disturbo autosomico recessivo caratterizzato dall'accumulo di rame nel fegato e nel cervello, portando a sintomi epatici e neurologici. L'anticorpo targeting una regione vicino al C-terminale (aa 1251-1351), che può rilevare le forme a lunghezza intera e clivate.

Guida Sperimentale e Suggerimenti Tecnici

• Design dell'immunogeno: L'immunogeno copre gli aminoacidi 1251–1351 nella regione C-terminale, che è ben conservata tra le specie (spiegando la reattività crociata con topo e ratto). Questa regione è prevista essere citoplasmatica basandosi su modelli topologici, potenzialmente producendo anticorpi che riconoscono sia la forma a lunghezza intera che i frammenti C-terminali.
• Western blotting: Il peso molecolare previsto di ATP7B è di ~157 kDa. Utilizzare un gel a bassa percentuale (es. 6–8%) e assicurare adeguate condizioni di trasferimento (es. trasferimento umido con riduzione di metanolo) per proteine ad alto peso molecolare. L'anticorpo può anche rilevare la forma clivata di 140 kDa (WND/140) nel fegato o in linee cellulari.
• IHC-P: Ottimizzare il recupero dell'antigene (es. tampone citrato o EDTA mediato dal calore) e includere controlli appropriati (es. tessuto epatico come positivo, controllo isotipico). La colorazione negli epatociti dovrebbe localizzarsi al TGN e mostrare ridistribuzione sotto sfida di rame.
• ELISA: L'immunogeno ricombinante può servire come standard per saggi quantitativi. Validare la linearità e la sensibilità utilizzando lisati caricati con rame o sovraesprimenti ATP7B.

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