Anticorpo policlonale anti-ATR per WB, IHC-P, ELISA - Q13535

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione dell'ATR

• ATR è una chinasi proteica serina/treonina che riconosce la sequenza consenso del substrato [ST]-Q, attivando la segnalazione del checkpoint in seguito a danni al DNA (PubMed:10597277, PubMed:10608806, PubMed:10859164).
  Riferimenti correlati: PMID:10597277, PMID:10608806, PMID:10859164

• ATR fosforila diversi bersagli a valle tra cui BRCA1, CHEK1, MCM2, RAD17, RBBP8, RPA2, SMC1 e p53/TP53, inibendo così la replicazione del DNA e la mitosi mentre promuove la riparazione del DNA e l'apoptosi (PubMed:11114888, PubMed:11418864, PubMed:11865061).
  Riferimenti correlati: PMID:11114888, PMID:11418864, PMID:11865061

• Fosforila la variante dell'istone H2AX alla Ser-139 nei siti di danno al DNA, regolando la risposta al danno del DNA (PubMed:11673449).
  Riferimenti correlati: PMID:11673449

• Necessario per l'ubiquitinazione di FANCD2 e critico per il mantenimento della stabilità dei siti fragili e la regolazione efficiente della duplicazione del centrosoma (PubMed:15314022, PubMed:12526805).
  Riferimenti correlati: PMID:15314022, PMID:12526805

• Agisce come regolatore della transizione S-G2 limitando l'attività di CDK1 durante la fase S per prevenire l'ingresso prematuro in G2 (PubMed:30139873).
  Riferimenti correlati: PMID:30139873

• Si localizza all'involucro nucleare e agisce come sensore di stress meccanico, mediando la segnalazione del checkpoint tramite la fosforilazione di CHEK1; promuove anche la rottura dell'involucro nucleare in risposta al danno del DNA fosforilando LMNA alla Ser-282 (PubMed:25083873, PubMed:37832547).
  Riferimenti correlati: PMID:25083873, PMID:37832547

• È coinvolto nella risposta infiammatoria all'instabilità genomica: si localizza nei micronuclei e fosforila LMNA alla Ser-395, preparandolo per la fosforilazione mediata da CDK1, portando alla rottura dell'involucro micronucleare e all'attivazione della via cGAS-STING e della risposta dell'interferone di tipo I (PubMed:37788673).
  Riferimenti correlati: PMID:37788673

• Espresso ubiquitariamente con i livelli più alti nei testicoli; l'isoforma 2 si trova nel pancreas, placenta e fegato ma non nel cuore, testicoli e ovaio.

Guida sperimentale e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno corrisponde agli amminoacidi 400–500 dell'ATR umano, una regione coinvolta nelle interazioni proteina-proteina; il siero policlonale può riconoscere più epitopi all'interno di questo frammento.
• Per il Western blotting, ci si aspetta una banda specifica a ~301 kDa; utilizzare un marcatore di peso molecolare elevato, un gel SDS-PAGE a bassa percentuale (6%) e un trasferimento a umido prolungato per migliorare la risoluzione e l'efficienza di trasferimento.
• Validare la reattività crociata con l'ATR di topo e ratto confrontando i lisati dai controlli positivi; l'identità della sequenza è elevata, ma confermare con linee cellulari o tessuti noti.
• Nell'immunoistochimica (IHC-P), eseguire il recupero dell'antigene (es. ad esempio tampone citrato, pH 6,0) e includere un controllo senza primario o con peptide di blocco per valutare la specificità della colorazione.
• Per l'ELISA, l'anticorpo può essere utilizzato come reagente di rilevamento; l'abbinamento con un anticorpo di cattura contro un epitopo distante può migliorare le prestazioni del saggio; validare con standard proteici ricombinanti.

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