Anticorpo Policlonale Anti-AUH Coniglio per WB, ELISA - Q13825

Specifiche e Parametri Principali del Prodotto

Contesto Biologico: Funzione e Localizzazione di AUH

• AUH codifica per la metilglutaconil-CoA idratasi, un enzima mitocondriale noto anche come enoil-CoA idratasi legante RNA specifica per AU. Svolge un duplice ruolo nel catabolismo della leucina e nel metabolismo dell'RNA.
• Catalizza l'idratazione del 3-metilglutaconil-CoA a 3-idrossi-3-metilglutaril-CoA (HMG-CoA) nella via di degradazione della leucina, un passaggio chiave per la produzione di corpi chetonici (PubMed:11738050, 12434311, 12655555, 16640564).
  Riferimenti correlati:
  PMID:11738050 PMID:12434311 PMID:12655555 PMID:16640564
• Mostra in vitro una specificità di substrato più ampia, inclusi glutaconil-CoA, crotonil-CoA e 3-metilcrotonil-CoA, sebbene con affinità inferiore (PubMed:16640564).
  Riferimenti correlati:
  PMID:16640564
• Si lega agli elementi ricchi di AU (ARE) nell'mRNA, suggerendo un ruolo nella regolazione della stabilità e del decadimento dell'mRNA (PubMed:7892223).
  Riferimenti correlati:
  PMID:7892223
• Può funzionare come itaconil-CoA idratasi nella via catabolica del C5-dicarbossilato, detossificando il metabolita antimicrobico itaconato prodotto dai macrofagi (PubMed:29056341).
  Riferimenti correlati:
  PMID:29056341
• Si localizza prevalentemente nella matrice mitocondriale, in linea con le sue funzioni metaboliche.
• Le modifiche post-traduzionali includono l'acetilazione e la proteina subisce uno splicing alternativo, aggiungendo diversità funzionale.
• Le varianti genetiche di AUH sono associate a malattie, sottolineandone l'importanza clinica.

Guida Sperimentale e Consigli Tecnici

• L'immunogeno utilizzato corrisponde agli amminoacidi 68–339 di AUH umano, coprendo una porzione significativa della proteina matura. Ciò può favorire il riconoscimento sia delle conformazioni native che denaturate in varie applicazioni.
• Per il Western blot, ci si aspetta una banda intorno a 36 kDa (o 35,6 kDa secondo UniProt). Utilizzare lisati arricchiti di mitocondri o linee cellulari con espressione confermata di AUH come controlli positivi per verificare la specificità della banda.
• In ELISA, la rivestitura diretta con proteina AUH ricombinante o il frammento immunogeno può servire come strategia di cattura. Considerare l'accoppiamento con un anticorpo di rilevamento che riconosca un epitopo distinto per lo sviluppo di ELISA sandwich.
• Per confermare la specificità del bersaglio, si raccomanda il knockdown mediato da siRNA o il knockout CRISPR di AUH in linee cellulari pertinenti per osservare la perdita del segnale in WB.
• Data l'elevata omologia di sequenza tra AUH umano, di topo e di ratto, l'anticorpo potrebbe reagire in modo incrociato con queste specie. Convalidare sempre la reattività nei campioni derivati dalla specie appropriata se si lavora con sistemi non umani.

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