Anticorpo monoclonale di coniglio Anti-Beclin 1 (validato KO) per WB e ELISA - Q14457

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione della Beclin 1

• La Beclin-1 svolge un ruolo centrale nell'autofagia come subunità fondamentale del complesso fosfatidilinositolo 3-chinasi (PI3K) di classe III, mediando la formazione del fosfatidilinositolo 3-fosfato; forme distinte del complesso (PI3KC3-C1 e PI3KC3-C2) guidano rispettivamente l'inizio e la maturazione dell'autofagosoma (PubMed:18570871, PubMed:21358617, PubMed:23184933).
  Riferimenti correlati: PMID:18570871 PMID:21358617 PMID:23184933

• È inoltre coinvolta nel traffico endocitico degradativo, nell'endocitosi e nella fase di scissione della citochinesi, probabilmente nel contesto del PI3KC3-C2 (PubMed:20208530, PubMed:20643123, PubMed:23974797, PubMed:25275521).
  Riferimenti correlati: PMID:20208530 PMID:20643123 PMID:23974797 PMID:25275521

• La Beclin-1 si localizza ampiamente nel citoplasma, nell'apparato di Golgi, nella membrana della rete trans-Golgi, nella membrana degli endosomi, nella membrana del reticolo endoplasmatico, nella membrana mitocondriale, negli autofagosomi e nel nucleo, in linea con le sue diverse funzioni di traffico e di segnalazione.

• Un frammento C-terminale di 35 kDa (Beclin-1-C) si localizza specificamente nei mitocondri, dove può promuovere l'apoptosi induttando la traslocazione di BAX e il rilascio di fattori pro-apoptotici.

• Contribuisce alla difesa antivirale dell'ospite; per esempio, protegge dall'infezione da un ceppo neurovirulento del virus Sindbis.

• L'espressione della Beclin-1 è ubiquitaria, evidenziando il suo ruolo fondamentale nell'omeostasi cellulare.

• La proteina è soggetta a molteplici modifiche post-traduzionali, tra cui fosforilazione, acetilazione e ubiquitinazione (come indicato dalle parole chiave: Fosfoproteina, Acetilazione, Coniugazione Ubl, Legame isopeptidico), che modulano la sua attività nell'autofagia e nell'apoptosi.

Indicazioni sperimentali e consigli tecnici

• L'immunogeno comprende i 280 amminoacidi N-terminali, coprendo domini funzionali critici; questo design può consentire la rilevazione sia della Beclin-1 full-length (~52 kDa) sia dell'isoforma mitocondriale di 35 kDa in alcuni contesti.
• Per il Western blotting, si consiglia di utilizzare lisati di cellule intere di origine umana, di topo o di ratto. Nonostante il peso molecolare previsto sia 52 kDa, la banda può apparire vicino a 60 kDa a causa delle modifiche post-traduzionali; se disponibile, eseguire la validazione con controlli knockout.
• Nelle applicazioni ELISA, l'anticorpo può essere utilizzato per ELISA diretta o di cattura; le diluizioni di lavoro ottimali devono essere determinate empiricamente con la matrice di campione pertinente.
• Poiché l'espressione della Beclin-1 può essere indotta da stimoli autofagici, l'aggiunta di controlli positivi (es. cellule trattate con digiuno o rapamicina) può aiutare nella validazione del saggio.

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