Anticorpo policlonale Anti-beta 2 Microglobulina per WB, IHC-P, ELISA - P61769

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione della beta 2 Microglobulina

• La beta-2-microglobulina (B2M) è la catena leggera del complesso di istocompatibilità maggiore di classe I (MHC I), essenziale per la presentazione di antigeni peptidici alle cellule T CD8+, svolgendo così un ruolo critico nell'immunità adattativa.
• È una proteina secreta trovata anche sulla superficie cellulare associata non covalentemente alla catena pesante del MHC I; il suo ripiegamento e assemblaggio sono fondamentali per un'espressione stabile del MHC I.
• La proteina EsxA esogena di Mycobacterium tuberculosis si lega alla B2M e riduce il suo esportazione sulla superficie cellulare, potenzialmente compromettendo la presentazione dell'antigene di classe I (PubMed:25356553).
  Riferimenti correlati: PMID:25356553
• Strutturalmente, la B2M contiene un dominio simile a immunoglobulina ed è stabilizzata da un legame disolfuro intramolecolare (Cys25-Cys80). È una glicoproteina che subisce modifiche post-traduzionali inclusa la glicazione e la formazione di piroglutammato N-terminale.
• Le mutazioni nella B2M sono collegate all'ipoproteinemia ipercatabolica familiare e all'amiloidosi, dove può formare depositi fibrillari nei tessuti, in particolare nell'amiloidosi correlata alla dialisi.
• Nonostante le sue piccole dimensioni (~13,7 kDa teoriche), la beta-2-microglobulina migra a circa 14 kDa su SDS-PAGE in condizioni riduttive.

Guida sperimentale e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno corrisponde alla forma secreta matura (amminoacidi 21-119), escludendo il peptide segnale; l'anticorpo può riconoscere sia la B2M ridotta che non ridotta, ma per risultati coerenti, validare in condizioni denaturanti e riduttive (es. riscaldamento a 95°C con DTT) per interrompere i legami disolfuro.
• Per il Western blot, caricare 10–30 µg di lisato cellulare totale o siero concentrato, e utilizzare un controllo positivo come tessuto ricco di linfociti (milza, linfonodo) o linee cellulari che esprimono MHC I.
• Nell'immunoistochimica su sezioni paraffinate e fissate in formalina (IHC-P), eseguire il recupero dell'antigene con tampone citrato (pH 6,0) o tampone EDTA (pH 9,0) e considerare un esperimento di titolazione per ottimizzare l'intensità della colorazione.
• L'anticorpo mostra reattività crociata con la B2M di topo e ratto, rendendolo adatto per modelli roditori; verificare l'omologia di sequenza e testare i lisati dei tessuti rilevanti per confermare la reattività di specie.
• Per ELISA, può essere utilizzato come anticorpo di cattura o di rilevamento; l'abbinamento con un altro clone che riconosce un epitopo diverso può migliorare la sensibilità negli assay a sandwich. Ottimizzare i tamponi di rivestimento e i fattori di diluizione.
• A causa della secrezione della B2M, è possibile analizzare campioni privi di cellule; per target a bassa abbondanza, potrebbe essere necessario l'arricchimento tramite immunoprecipitazione o concentrazione.

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