Anticorpo monoclonale coniglio Anti-CAD per WB, IF/ICC, ELISA - P27708

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione della CAD

• La CAD è un grande enzima multifunzionale che codifica le prime tre attività della via biosintetica de novo delle pirimidine: carbamoylfosfato sintetasi (CPSasi), aspartato transcarbamilasi (ATCasi) e diidroorotasi (DHOasi).
• L'attività CPSasi coinvolge un dominio amidotransferasi dipendente dalla glutammina (GATasi) che genera ammoniaca, che viene poi utilizzata dal dominio sintetasi per produrre carbamoylfosfato da ATP e bicarbonato.
• Il carbamoylfosfato prodotto viene convogliato al sito attivo dell'ATCasi, che catalizza la formazione di carbamoyl-L-aspartato da L-aspartato.
• Infine, il dominio DHOasi cicizza il carbamoylaspartato per formare diidroorotato, il precursore per la sintesi di UMP.
• La CAD è localizzata sia nel citoplasma che nel nucleo.
• Le modifiche post-traduzionali della CAD includono acetilazione e fosforilazione, che regolano la sua attività e il flusso della via metabolica.
• Le mutazioni nel gene CAD sono associate a disordini congeniti della glicosilazione (CDG1Z) e all'encefalopatia epilettica e dello sviluppo (DEE50, EIEE50).
• La proteina ha un peso molecolare di circa 243 kDa e contiene più domini con siti di legame per ATP, ioni metallici (magnesio, manganese, zinco) e nucleotidi.

Indicazioni sperimentali e consigli tecnici

• L'immunogeno è un peptide sintetico corrispondente alla regione N-terminale (aa 1–100) della CAD umana, che probabilmente bersaglia il dominio GATasi. Verificare la specificità nei modelli cellulari pertinenti.
• Per la rilevazione Western blot della proteina da 243 kDa, utilizzare un gel di poliacrilammide a bassa percentuale (es. 6–8%) e tempi di trasferimento prolungati per garantire un trasferimento efficiente.
• Nell'IF/ICC, considerare la fissazione con PFA al 4% e la permeabilizzazione con Triton X-100 allo 0,1% per rilevare sia la frazione citoplasmatica che quella nucleare.
• Per l'ELISA, l'anticorpo può essere applicato in formati diretti o sandwich; includere il peptide immunogeno come controllo positivo.
• L'espressione endogena della CAD varia tra i tipi cellulari; validare l'anticorpo nel vostro sistema sperimentale, ad esempio cellule HeLa o HEK293.
• La reazione crociata con specie diverse da quella umana non è stata determinata; eseguire l'allineamento di sequenza se si testano campioni non umani.

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