Anticorpo Policlonale Anti-CARD8 per WB, ELISA - Q9Y2G2

Specifiche e Parametri Fondamentali del Prodotto

Contesto Biologico: Funzione e Localizzazione di CARD8

• CARD8 (proteina 8 contenente il dominio di reclutamento della caspasi), noto anche come CARDINAL, TUCAN, NDPP1, DAKAR, DACAR o NDPP, è un membro della famiglia delle proteine contenenti il dominio CARD.
• CARD8 agisce come sensore dell'inflammasoma, riconosce segnali di patogeno/danno come l'attività della proteasi dell'HIV-1 o l'inibitore Val-boroPro e media l'attivazione dell'inflammasoma che porta alla piroptosi delle cellule T CD4+ e dei macrofagi.
  Riferimenti correlati: PMID:11408476, PMID:11821383, PMID:15030775, PMID:32840892, PMID:33542150, PMID:36357533
• La proteina full-length subisce un processo di autoprotolisi all'interno del dominio FIIND, generando frammenti N-terminale e C-terminale che rimangono associati in modo non covalente in assenza di stimoli.
• Dopo il rilevamento del patogeno, il frammento N-terminale viene ubiquitinato e degradato dal proteasoma, rilasciando il frammento C-terminale per formare l'inflammasoma CARD8, che recluta direttamente la pro-caspasi-1 e ne promuove l'attivazione, con conseguente clivaggio di GSDMD e piroptosi.
  Riferimenti correlati: PMID:32558991, PMID:32051255, PMID:32840892, PMID:33053349, PMID:34019797
• Oltre al suo ruolo nell'inflammasoma, CARD8 funziona anche come regolatore negativo dell'attivazione di NF-kappa-B e dell'inflammasoma NLRP3.
  Riferimenti correlati: PMID:11551959, PMID:12067710, PMID:24517500
• CARD8 è localizzato nel citoplasma, nel nucleo e nei complessi assemblati dell'inflammasoma.
• CARD8 è altamente espresso nel polmone, nell'ovaio, nel testicolo e nella placenta, con espressione più bassa nel cuore, nel rene e nel fegato; è espresso anche nella milza, nei linfonodi e nel midollo osseo.
  Riferimenti correlati: PMID:11551959, PMID:11821383
• CARD8 svolge un ruolo nella difesa dell'ospite contro l'HIV-1: rileva l'attività della proteasi dell'HIV-1, portando all'eliminazione del virus latente dopo la riattivazione virale, mentre l'HIV-1 può eludere il rilevamento mantenendo l'inattività della proteasi nelle cellule infettate.
  Riferimenti correlati: PMID:33542150

Indicazioni Sperimentali e Consigli Tecnici

• L'immunogeno corrisponde alla regione amminoacidica N-terminale 1-200, quindi l'anticorpo riconosce probabilmente CARD8 full-length e il suo frammento N-terminale. Si consiglia di verificare la specificità analizzando i prodotti dell'autoprotolisi nei lisati cellulari.
• Per il western blot, utilizzare linee cellulari o tessuti umani con espressione confermata di CARD8 (ad esempio, macrofagi THP-1, lisati di polmone o ovaio). La proteina full-length prevista ha un peso di ~61 kDa, ma possono essere rilevati anche frammenti di clivaggio. Includere controlli positivi e negativi adeguati.
• Per l'ELISA, l'anticorpo può essere utilizzato in formati sandwich o indiretti. Abbinarlo a un anticorpo di rilevamento contro un epitopo distinto di CARD8 per garantire la specificità del test.
• Poiché questo anticorpo policlonale è validato per CARD8 umano, la reattività crociata con altre specie deve essere testata sperimentalmente. Si consiglia di utilizzare attivatori dell'inflammasoma (ad esempio Val-boroPro) o inibitori della proteasi dell'HIV-1 in modelli di infezione appropriati per studiare la dinamica di CARD8.

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