Anticorpo Monoclonale Anti-Caspasi-8 da Coniglio per WB, IP, IF/ICC, ELISA - O89110

Specifiche e Parametri Principali del Prodotto

Contesto Biologico: Funzione e Localizzazione della Caspasi-8

• La Caspasi-8 è una tiol proteasi che funge da interruttore molecolare per la morte cellulare programmata, integrando segnali per apoptosi, necroptosi e piroptosi per prevenire danni tissutali durante lo sviluppo e l'età adulta. Riferimenti correlati: PMID:12065591 PMID:18455983 PMID:30361383
• Agisce come caspasi iniziatrice nella via apoptotica estrinseca, reclutata dai recettori di morte (FAS/CD95, TNFRSF1A) tramite FADD per formare il complesso di segnalazione che induce la morte (DISC), dove viene attivata proteoliticamente e successivamente cliva le caspasi effettrici a valle (CASP3, CASP6, CASP7) e BID per innescare il rilascio del citocromo C mitocondriale. Riferimenti correlati: PMID:24813849 PMID:24813850 PMID:9654089 PMID:9727491 PMID:9727492
• La Caspasi-8 regola negativamente la necroptosi clivando RIPK1 in Asp-325, un evento critico che previene l'auto-fosforilazione di RIPK1 e limita la morte cellulare e l'infiammazione indotte da TNF. Riferimenti correlati: PMID:31511692
• In condizioni specifiche (es. inibizione di TAK1), la Caspasi-8 può avviare la piroptosi clivando e attivando la gasdermina-C (GSDMC) e la gasdermina-D (GSDMD), portando alla formazione di pori e alla morte cellulare litica. Riferimenti correlati: PMID:30361383 PMID:30381458
• Funziona anche nell'immunità innata clivando e inattivando il regolatore negativo N4BP1 a valle di TLR3 e TLR4, promuovendo così la produzione di citochine. Riferimenti correlati: PMID:32971525
• La Caspasi-8 è prevalentemente citoplasmatica ma può anche localizzarsi nel nucleo. È ampiamente espressa, con livelli più alti in milza, timo, polmone, fegato e rene, e livelli più bassi in cuore, cervello, testicolo e muscolo scheletrico.
• La proteina è soggetta ad acetilazione e fosforilazione, ed è sintetizzata come uno zimogeno inattivo che richiede dimerizzazione e clivaggio per la piena attività. Appartiene alla famiglia delle peptidasi C14A di proteasi cisteina-dipendenti dirette all'aspartato.

Guida Sperimentale e Consigli Tecnici

• L'immunogeno copre i residui 1-218 della Caspasi-8 di topo, comprendendo il dominio pro-N-terminale. Considerare questa regione quando si progettano strategie di rilevamento, poiché gli anticorpi possono riconoscere sia le forme a lunghezza intera che quelle parzialmente processate.
• Per il Western blot, è attesa una banda intorno a 55 kDa, ma possono apparire frammenti di clivaggio più piccoli dopo l'induzione dell'apoptosi. Convalidare la specificità utilizzando controlli positivi e negativi appropriati nel proprio sistema cellulare.
• L'immunoprecipitazione e l'immunofluorescenza/ICC sono compatibili con questo anticorpo monoclonale da coniglio. Ottimizzare i passaggi di fissazione e permeabilizzazione per target intracellulari e includere controlli isotipo.
• In ELISA, utilizzare questo anticorpo come reagente di cattura o di rilevamento in formati sandwich. Confermare le prestazioni con standard proteici ricombinanti per stabilire linearità e sensibilità.

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