Anticorpo policlonale anti-Caspasi-9 per WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA - P55211

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: funzione e localizzazione della Caspasi-9

• La Caspasi-9, nota anche come proteasi apoptotica Mch-6 (MCH6), APAF-3 o ICE-LAP6, è un membro della famiglia delle proteasi dell'acido cisteina-aspartico (caspasi) ed è codificata dal gene CASP9 nell'uomo.
• Funziona come caspasi iniziatrice nella via intrinseca dell'apoptosi. In seguito al rilascio del citocromo c e alla formazione dell'apoptosoma Apaf-1, la caspasi-9 viene reclutata e attivata, scindendo e attivando successivamente le caspasi effettrici-3 e -7. Scinde inoltre la poli(ADP-ribosio) polimerasi (PARP) e promuove l'apoptosi indotta dal danno al DNA in modo dipendente da ABL1. Inoltre, la caspasi-9 scinde proteoliticamente BIRC6 in seguito all'inibizione mediata da DIABLO/SMAC del complesso BIRC6-caspasi. Riferimenti correlati: PMID:36758105 PMID:36758106
• Lo splicing alternativo di CASP9 produce un'isoforma cataliticamente inattiva che agisce come inibitore dominante-negativo della segnalazione della caspasi-9.
• La Caspasi-9 è espressa ubiquitariamente, con i livelli più elevati nel cuore, dove si trova specificamente nei miociti. Un'espressione moderata è osservata nel fegato, nel muscolo scheletrico e nel pancreas.
• Le modifiche post-traduzionali includono la fosforilazione e la coniugazione simil-ubiquitina, come indicato dai dati di proteomica, che ne regolano l'attività, la stabilità e l'interazione con altre proteine.
• La proteina viene sintetizzata come zimogeno inattivo che richiede un processamento proteolitico per l'attivazione. In quanto proteasi tiolica, utilizza un residuo di cisteina catalitica per l'idrolisi ed è classificata tra le idrolasi correlate all'apoptosi.

Indicazioni sperimentali e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno utilizzato per questo anticorpo corrisponde agli amminoacidi 139–416 della caspasi-9 umana (NP_001220.2). Questa regione copre parte del grande dominio catalitico, riconoscendo potenzialmente sia le forme a lunghezza completa sia quelle scisse. Nel Western blot, per la proforma può essere rilevata una banda a circa 46 kDa, con bande aggiuntive corrispondenti ai frammenti scissi a seconda del trattamento del campione.
• L'anticorpo è raccomandato per Western blot (WB), immunofluorescenza/immunocitochimica (IF/ICC), immunoistochimica (IHC-P) ed ELISA. I ricercatori dovrebbero ottimizzare le diluizioni e includere controlli positivi e negativi appropriati, soprattutto quando lavorano con campioni umani, di topo e di ratto.
• Poiché la caspasi-9 è principalmente una proteina citoplasmatica che trasloca nei mitocondri durante l'apoptosi, la localizzazione subcellulare può variare e le condizioni di fissazione/permeabilizzazione per IF/ICC o IHC-P dovrebbero essere adattate di conseguenza.

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