Anticorpo monoclonale di coniglio anti-CD117/c-Kit per WB, ELISA - P05532

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: funzione e localizzazione di CD117/c-Kit

• Identità della proteina: CD117/c-Kit è il recettore del fattore di crescita delle cellule mastocitarie/staminali Kit, una tirosin-chinasi recettoriale codificata dal gene Kit (GeneID murino: 16590). È noto anche come proto-oncogene c-Kit.
• Funzione principale: agisce come recettore di superficie cellulare per la citochina KITLG/SCF e svolge ruoli essenziali nella sopravvivenza cellulare, nella proliferazione, nell'ematopoiesi, nel mantenimento delle cellule staminali, nella gametogenesi, nello sviluppo, nella migrazione e nella funzione delle cellule mastocitarie e nella melanogenesi.
• Vie di segnalazione: in seguito al legame con SCF, KIT attiva molteplici cascate di segnalazione, tra cui le vie PI3K/AKT, RAS/MAPK, la mobilizzazione del calcio mediata da PLCγ e le vie JAK/STAT. Fosforila adattatori ed enzimi chiave come PIK3R1, PLCG1, CBL e SRC.
• Isoforme e specificità tissutale: lo splicing alternativo genera diverse isoforme. L'isoforma 1 è ampiamente espressa (fegato fetale, midollo osseo). L'isoforma 3 è arricchita nelle cellule staminali ematopoietiche. Il rilevamento a livello proteico mostra le isoforme 1 e 2 nel midollo osseo, negli spermatogoni e negli spermatociti; l'isoforma 3 nelle spermatidi rotonde/in allungamento e negli spermatozoi.
• Localizzazione subcellulare: localizzata principalmente nella membrana cellulare; si trova anche nel citoplasma.
• Modificazioni post-traduzionali e caratteristiche strutturali principali: il recettore è una glicoproteina con legami disolfuro, domini immunoglobulinici e un dominio tirosin-chinasico citoplasmatico. È soggetto a fosforilazione e ubiquitinazione, che regolano la segnalazione e la degradazione.
• Parole chiave: proto-oncogene, tirosina-proteina chinasi, legame all'ATP, legame al magnesio/metallo, elica transmembrana, coniugazione Ubl, ripetizione, segnale.

Linee guida sperimentali e consigli tecnici

• L'immunogeno è una proteina ricombinante corrispondente a CD117/c-Kit murino. Per il Western blot, il peso molecolare previsto della proteina a lunghezza intera è di circa 109 kDa; si osserva generalmente una banda intorno a questo valore. Il peso della proteina indicato riporta anche 23 kDa, che potrebbe rappresentare il frammento ricombinante.
• Durante l'esecuzione del WB, si consiglia di utilizzare condizioni riducenti e controlli positivi appropriati (ad esempio lisati di cellule mastocitarie o cellule ematopoietiche murine). L'espressione endogena nei tessuti deve essere verificata nel sistema campione pertinente.
• Per l'ELISA, l'immunogeno ricombinante può essere utilizzato come antigene di rivestimento o standard, ma le condizioni ottimali di rivestimento e gli intervalli di rilevamento devono essere determinati empiricamente.
• Validare le prestazioni dell'anticorpo nell'applicazione specifica e nella matrice del campione, poiché le condizioni possono influenzarne specificità e sensibilità.

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